简介
表皮细胞的培养实验是指在体外条件下表皮细胞的培养。
原理
表皮细胞的培养实验的基本原理是用特定的消化酶处理皮肤组织块，其表皮可在基膜处与真皮发生分离，当表皮被消化成细胞团或单细胞后，用适当的培养液加以培养，表皮细胞即可发生大量的增殖。
材料与仪器
器材：
① 新生 1～2 d 的小鼠
② 培养瓶
③ 吸管
④ 胶帽
⑤ 培养皿
⑥ 眼科剪
⑦ 眼科镊
⑧ 离心机
⑨ 倒置显微镜
⑩ 超净工作台
⑪ CO2 培养箱等
⑫ 胶帽
试剂:
① D-Hanks 液
② DMEM 培养基（含 10% 胎牛血清）
③ 0.25% 胰蛋白酶液
步骤
表皮细胞的培养实验基本过程可分为以下几步：
（1）取材
A. 取新生 1～2 d 的小鼠背部皮肤一块，去除皮肤下的脂肪组织。
B. D-Hanks 液清洗皮肤块 3 遍，用眼科剪将皮肤剪成 0.5 x 1.0 c㎡小块，置于 0.25％ 胰酶中。
（2）消化及接种
A. 于 4 ℃ 消化 24 h 或 37 ℃ 消化 2～3 h。
B. 用眼科镊将表皮与真皮仔细分离。
C. 将分离出的表皮置于离心管中，加入含 10％ 胎牛血清的 DMEM 培养液，吹打表皮，制备细胞悬液。
D. 2000r/min 离心 10 min，弃上清。
E. 加入含 10％ 胎牛血清的 DMEM/F12 培养基，混匀后，按 1 x 106 个/ml 细胞密度接种于 25 ml 培养瓶中。
F. 37 ℃ 培养 4 h，轻轻吸去培养上清，加入新鲜的培养基继续培养。
G. 2 d 后，于倒置相差显微镜下观察细胞并照相。
H. 弃去原培养基，加入新鲜培养基，继续培养 3 d、7 d，于倒置相差显微镜下观察细胞并照相。
注意事项
1. 取材后，皮肤下的脂肪组织一定要清除干净，否则残留的脂肪组织会影响酶消化效果。
2. 消化前，用眼科剪剪皮肤时，应控制皮肤块的大小。若皮肤块太大，胰蛋白酶对皮肤的作用将不完全；若皮肤块太小，在胰酶作用后分离表皮与真皮的过程不易操作。
3. 对胰蛋白酶消化的表皮进行吹打，使其分散为单细胞或细胞团时，常有部分残存表皮不易被吹打分散，组成这些表皮的细胞主要来自角质层，其细胞的分化程度高、彼此间连接紧密，细胞一般无增殖能力，因此，可不必对这些表皮进行继续吹打。
4. 表皮细胞的体外培养中，基底层细胞是主要增殖的细胞，其数量在表皮细胞总量中仅占较小部分，因此，为提高培养细胞的存活率，应适当地增大接种细胞数量。
来源：丁香实验
