用胰蛋白酶分离皮肤后，从真皮层刮取表皮细胞时，角质形成细胞培养中有很多间质细胞，怎么去除污染？

细胞污染挽救

对于贴壁生长的细胞，相对来说比较简单但也很麻烦。以下我主要讨论贴壁生长的细胞。

在讨论之前，大家首先要有一个概念，即洁净区，并不是没有细菌，而是细菌的数量非常少，国家标准100级的洁净标准是浮游菌数不得超过5个每立方米，沉降菌数不得超过1个每培养皿.而国外的标准比我国的还要高一点，要求的数量更少。

所以在我们的洁净操作台里，并不是真正一个细菌都没有的，所以在操作的时候还是要尽量利索迅速地完成操作。尽量减少进入培养体系细菌的数量。

所以处理细菌污染的重要原则就是：无限地稀释细菌的浓度，无限地减少细菌的数量！

1）.将污染的培养液倒掉，转烧瓶口，加入10mlPBS，适当晃动清洗培养瓶，然后倒掉。转烧瓶口。

2）.继续加入10mlPBS，同样方法晃动，清洗培养瓶，然后倒掉。

3）.继续加入5mlPBS，同样方法洗瓶，主要是培养面，然后倒掉。

4）.重复步骤3再洗。

5）.重复步骤3再洗。

6）.加入3-5ml双抗，洗瓶，静置3-5分钟，然后吸出。

7）.加入3ml双抗，洗瓶，静置3-5分钟，然后吸出。

8）.再加入5mlPBS洗瓶，然后吸出。

9）.加入10ml培养液，加入2ml双抗，放置培养箱培养，5小时之后，倒掉培养基，加入PBS洗瓶两次，然后加入胰酶消化，吹打后置于离心机800-1000r/min离心，然后洗一次。置于新的培养瓶里培养，培养体系加入2ml双抗。

10）.24h之后，视情况换液，若仍然污染严重，培养基浑浊，重复以上步骤，若看不到污染物，则继续步骤1)、3）、4）、6）、8），然后加入培养液培养，培养体系加入2ml双抗.

11).24h之后，若仍污染严重，可再重复一次，若还污染只能弃之（不过一般没有出现这种情况），若镜下不见污染物，则换液PBS洗瓶，正常培养。

以上方法主要是针对贴壁生长的细胞，在操作的过程中，一定要小心操作动作，轻柔缓慢，切忌大动作鲁莽。防止细胞脱落。以上方法操作得当，基本上都能救活你的细胞。当然如果你的细胞仍有富余或者冻存的，我还是建议你把污染的扔掉，再复苏方便省事。

将皮肤活检材料置于聚维酮碘( Betadine）消毒液中30分钟，或者用适当加大浓度的青霉素和链霉素处理以防止污染。

可以用你养的细胞的特异性marker进行流失分选，或者是根据你细胞的大小进行分选