表皮细胞培养
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1.取材:取外科植皮或手术残余皮肤小块,以角化层薄者为佳,早产流产儿皮肤更好,切成0.5~1平方厘米小块。
2.EDTA处理:先置入0.02%EDTA中室温置5分钟。
3.冷消化:换入0.25%胰蛋白酶中,置4℃过夜。
4.分离:取出皮肤,用血管钳或镊子把表皮与真皮层分开。
5.温消化:取出表皮单独处理,用剪刀剪成更小的块后,置入新的0.25%胰蛋白酶中,37℃再消化30~60分钟。
6.用吸管轻轻反复吹打,使成细胞悬液。
7.培养液:通过80目不锈钢纱网滤过后,低速离心,吸上清,直接加入Eagle液和20%小牛血清,制成细胞悬液,接种入碟皿中,CO2温箱培养。