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细胞培养大全

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问细胞培养时~大家一般提前多久预热？

dxy_g0ob0d88

提前拿出来30分钟足够了，我们有时候也会放室温

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问重组蛋白用于体外细胞培养时内毒素标准相关问题

JCorona

1.内毒素对细胞是有影响的，尤其是免疫相关的细胞，例如RAW264.7；2.一般推荐内毒素的浓度低于5EU/mL

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问为什么细胞培养需要用到血清？

bqejjh123

加入动物血清是为了给体外培养的细胞提供一个类似生物体内的环境，此外动物血清中也包含了一些动物的激素和酶,可以促进细胞的发育。

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问大鼠平滑肌细胞培养，细胞不贴壁了是什么原因？

ptosir

你的细胞出现了比较明显的形态变化，有些变得更像上皮组织细胞了，如果不是细胞老化或细胞株本身有问题的因素，可能还是培养条件和培养方法的问题。说说你的具体培养方法吧

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问如何观察细胞污染？

丁香实验

观察细胞污染首先要从培养液的外观来看，看培养液是否清亮。当然，刚刚加入培养液是看不出来的。必需经过隔夜培养或更长时间才能看出来。如果培养液变混浊，则可断定细胞污染。其次，是从显微镜下观察，因细菌很小，所以观察时眼睛盯住一个视野，你会看见细小的黑点在动，细胞是不会动的，因此，可以断定那就是细菌。以上是小可培养细胞来观察污染的一点体会，仅供参考。不过以上情况还是少见或不见好，那就表明你的细胞养的好。

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问细胞培养背景发现移动的小点，是细胞污染？

SJ多可爱

有可能是细菌污染吧？后期培养液浑浊了吗？题主：没有浑浊，现在查了很多，还是怀疑黑胶虫污染，使用了黑胶虫清除剂好了很多使用黑胶冲清除剂后期还能见到会动的小黑点吗？题主：会少些，一旦停用就又会有我养的时候，细胞密度长到接近百分之90的时候，就基本上很少见到黑点，不影响细胞状态，没啥问题，细胞增殖没有问题，形态也没有问题，不必太在意这个黑点的，我见过好多养细胞都有这种会动的黑点，细胞生长不受影响，

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问细胞培养为什么会出现黑胶虫（第一次遇到）？

1641 围观

问细胞培养箱要如何清理消毒？

Topmicro

使用70％酒精或者洁尔灭全部擦拭一遍，开紫外灯照射即可，如果整个实验室环境太差需要熏蒸一遍。

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问树突状细胞培养需要什么条件？

dxywode

在倒置显微镜下观察细胞生长状态：如果没长满，将培养瓶用75%酒精消毒后在超净台内更换新鲜培养液，继续培养。如果细胞已经长满（约80%-90%）则传代后继续培养。

4 回答505 围观

问为什么 SD 大鼠神经干细胞培养时候会出现贴壁现象？

kudy

一般不会贴壁，贴壁的多是神经元样及胶质细胞

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问关于原代神经细胞培养细胞培养板？

bamboopiggy

将多聚赖氨酸稀释为0.1mg/ml，加入培养皿或将玻片浸入其中，5min，然后60度烘干1h，或室温干燥过夜

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问关于THP-1细胞培养问题（悬浮细胞自行贴壁）

丁香实验

我的thp-1前一段时间也出现了类似的问题，当时除了这种细胞，别的细胞状态也不太好。怀疑是污染了。纠结了很久，后来把那一批细胞都扔了，培养液的瓶子也换成了新的（实验室自己配的培养液，自己备瓶子装），复苏了新的细胞。现在thp-1细胞状态很好，背景干净，长的也很快。建议楼主有冻的细胞就复苏新的吧。状态好的时候多冻些——后面细胞状态可能是您手法问题（主要是血清问题最重要，您列的血清应没问题，要是黄色的

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问细胞培养的前期工作准备有哪些？比如器皿的消毒处理？

东月来星

我无聊跟你说说吧，1. 离心管、头、棉球、培养瓶、玻璃容器等需要消毒处理吗？高压还是浸泡？离心管、头之内的高压灭菌即可。棉球用酒精配。培养瓶和玻璃容器可以泡酸洗涤在高压。具体酸的配方论坛里就有。配个次强酸就行。可以用好久的。注意安全就好。2、血清需要过滤吗？还是需要怎样处理？不用过滤。关于灭活论坛里看法不一，自己收收看，自己选择。3、PBS配置后需要高压吗？高压，不高压，细胞污染了咋办。4、

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问细胞胞质疏松，状态不好，养不起来怎么办?

丁香实验

——解决办法1：一般情况下，从血清下手就行，要么换好血清，要么提高血清浓度，血清浓度提高到 15%～20% 培养 48 h，换成正常 10% 的浓度，用高浓度的血清培养时间过长对细胞有毒性。——解决办法2：血清下手之后可以同时采取提高细胞密度的方法，从培养瓶换到六孔板，12 孔板等，细胞密度大，细胞分泌的细胞因子多，肿瘤细胞通过旁分泌途径促进细胞生长。——预防办法：细胞胞质疏松，老化的原因在于细胞

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问外周血单个核细胞（PBMC）

丁香实验

破骨细胞没诱导培养过，刚看了下资料，猜测你估计是用血液单核细胞诱导法诱导分化培养，这个就需要贴壁的单核细胞，单核细胞是半贴壁的细胞，可以只加培养液不加血清诱导因子于培养箱孵育1-2h，然后用PBS慢慢清洗去除不贴壁的淋巴细胞和其他杂细胞杂质等，这样六孔板下单核细胞纯度就高了，看了你这图片，铺板密度有点低啊，以前做过2-undefined10^6/ml铺孔PBMC分离单个核细胞，然后洗涤纯化，单核纯度很高。然后加

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问大家来谈谈95D,95C的培养心得吧

丁香实验

谢谢评论，今天36h，细胞在10cm皿和六孔板里全死了。我估计消化确实有问题，但是不知道到底是消化过度还是消化不足。同时养的A549、293T贴壁也不好。12h了，贴壁后形态还是圆的，贴壁不稳当

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问CCK8实验求助…

丁香实验

历经三个月，终于测出了满意的结果，细胞量一定不能多，我最后用的5000/孔，其次，染毒加血清很重要，之前一直用的无血清培养基配药，所以实验组有时会高于对照组

3 回答1846 围观

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