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将多聚赖氨酸稀释为0.1mg/ml,加入培养皿或将玻片浸入其中,5min,然后60度烘干1h,或室温干燥过夜
府宅
以PBS配成1mg/ml的母液,-20度保存。使用时,用高纯度的蒸馏水稀释成0.11mg/ml的使用浓度,过滤除菌,以50微升每平方厘米的量均匀涂于培养底物的表面,室温下静置5min,吸除多余液体,股风吹干即可。
未来9
配制0.01%的多聚赖氨酸: 首先买来sigma 公司的多聚赖氨酸,如是25mg,就需要250ml三蒸水,用移液管将 少量三蒸水加到多聚赖氨酸的小塑料瓶中,然后将溶解的多聚赖氨酸加到200ml左右三蒸水中,(已置烧杯中)。最后加三蒸水达250ml,过滤除菌分装与小瓶中即可。保存于-20度,近期用的话可放于4度冰箱内保存。 注意每一小瓶的量不要太满,若20ml的瓶子,只装15ml可,若太满,放于-2度有可能会将瓶子弄碎,因冻后体积增加。(我就有这个教训) 另外烧杯,小瓶、移液管都要灭菌处理的,泡酸高压什么的。我们用的是一种用注射器过滤的过滤器,一次性的。一个能最多有效 过滤200ml。
铺板的操作:首先要在消毒实验室,包括超净台,紫外消度20-30分钟。消毒后30分钟进入实验室。事先准备100ml三蒸水,经高压灭菌处理首先打开板子,用消毒好的试管将0.01%的多聚赖氨酸加入每一孔中,大概每孔3-4滴吧。将板子盖好放到培养箱中(37度 5%CO2)30分钟。
取出板子,用吸管将多聚赖氨酸吸出。换吸管,加入三蒸水,冲洗三次,即将每孔内加入三蒸水,没过底,多点也行。再将水吸出来。反复三次。注意换吸管,要无菌操作的。
最后将铺好的板子放于培养箱待用。
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