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重组蛋白用于体外细胞培养时内毒素标准相关问题

相关实验:蛋白质的表达、分离、纯化实验

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丁香实验

最近在做蛋白纯化,因为纯化的蛋白要用于体外细胞培养,想问问各位蛋白中内毒素对细胞培养有没有影响?
内毒素要小于多少才能用于细胞培养和免疫小鼠,因为之前都没做过这方面的,再加上也没找到关于实验动物中内毒素含量标准,希望大家能帮忙回答一下。

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17 个回答

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dxy_4ix81at3

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  • 内毒素含量在5eu/ml比较好。
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JCorona

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1.内毒素对细胞是有影响的,尤其是免疫相关的细胞,例如RAW264.7;2.一般推荐内毒素的浓度低于5EU/mL
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verbalkint

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有影响,会引发动物的免疫反应,对细胞可能影响小一些但也是不好的。内毒素可以通过很多方法去除,比如分子筛,加detergent等等方法
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隔壁家的小夜猫子

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内毒素有专门的柱子可以去掉的,你可以用给质粒去内毒素的试剂盒试一下。
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ZZDX-YILILI

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如果用于细胞和动物实验的话,最好越小越好,用商业化的鲎试剂盒去除蛋白质内毒素一般就能达到 0.001Eu/ml 以下,所以采用标准化去内毒素试剂去就应该是没有问题的。
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内科小护士

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应该会有影响的,血清中内毒素含量越低,对细胞毒性越小,越利于细胞的生长和传代;反之,内毒素含量过高,会直接导致细胞状态不良。通常国际上要求血清中内毒素含量≤10EU/ml,此时血清被定为特级。
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dxy_h7vcp8v3

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内毒素对细胞培养是有影响的,因为它是毒素,可能对细胞产生毒害作用,建议低转速低温慢慢表达培养。其次,内毒素的浓度设置,建议可以设计浓度梯度,高 中 低三个浓度摸一下实验条件,在进行实验。
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dxy_d4xj2yg7

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小鼠免疫是制备抗体吗?我们做抗体的话,免疫小鼠都不限制内毒素的,影响不大。细胞实验一般<1EU/mg就可以,如果要求比较严格,可以控到0.5以下
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dxy_pni5ki46

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动物实验应该是没有内毒素标准,如果参考人的话是最大可接受注射剂量是5EU/kg/h,换算到小鼠身上就是0.05EU/10g体重,不过我觉得对于免疫动物应该影响不大,细胞培养的话内毒素会有影响,可以试试用内毒素去除树脂去除
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dxy_4uyyu09r

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内毒素的确养细胞会有影响,建议去除后再进行细胞培养。
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z流沙z

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内毒素里面主要是LPS,对细胞肯定是有影响的,有没有试剂盒提纯的时候,就是可以去除内毒素的?
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Guoood

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首先蛋白纯化过程中所用到的培养基,液体试剂均用注射用水配制,保证过程无菌。内毒素含量的话也没有明确的一个限制,但要尽可能的低,最好是能低于0.01EU/ug 。
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飞天幻雪

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这个没有具体要求。看你目的细胞的抗感染能力了,如果做细胞,最好在细胞里面重组蛋白,尽量不要用大肠杆菌来获取
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bamboopiggy

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你采用标签蛋白进行纯化的话,一般内毒素量不会大,对细胞影响不大,也可以用来免疫动物。
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一支肾上腺素

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内毒素对每种细胞的影响是不一样。在准备血清和其他试剂时,选择极低的内毒素(最好≤1EU/ml),对实验至关重要,至于具体小于多少,我没做过也没查到文献资料。
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vae1476

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内毒素会严重影响细胞生长的,避免内毒素影响需要注意,1是规范实验过程,例如全程使用灭菌注射用水,2是已经引入的通过超滤法等去除
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dxy_bq4uxnd

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蛋白质中的内毒素对细胞和动物的影响不是很大,不必太担心,如果担心的话可以使用去内毒素试剂或是柱子去除。
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