蛋白质在透析过程中有大量沉淀的原因？

相关实验：蛋白质的表达、分离、纯化实验

丁香实验

2022-01-12

我的蛋白质在透析过程中有大量沉淀，透析完成后上清基本没有蛋白了，我用透析液重悬沉淀跑胶发现目的蛋白都在沉淀里，这时候我可以用少量透析液重悬沉淀当做透析后的蛋白液体去检测活性吗？（8个孔的是透析完成后的对比，15孔的是透析装袋前的图）

21 个回答

是小杨同学

2022-01-20

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有可能是因为PH值，温度等引起的沉淀，也有可能是蛋白本身就不太稳定容易沉淀，可以超声或梯度透析试试看

lzy必有我师

2022-01-20

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1.中间多加几个透析梯度，2、注意低温，这样有利于蛋白质的正确折叠。 3、通过不断搅拌来降低吸附。 3.注意透析液PH

内科小护士

2022-01-20

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第一可能是浓度问题，第二透析袋本身有一定的吸附，可以通过磁力搅拌来降低吸附。第三透析液PH靠近等电点，像catzp说的，换buffer。

JCorona

2022-01-20

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透析出现沉淀，那可能蛋白都变性了，再检测活性也没有意义了啊。你应该先找到沉淀的原因，并想想怎么避免沉淀，有可能是透析液和原蛋白溶液的PH值差异较大，也可能是盐析。如果你的目标蛋白本身溶解性就低，那可以考虑换溶液或是再针对性地想其他办法。

dxyhsx123

2022-01-20

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出现蛋白沉淀，说明提取效果不好，不建议直接去检测活性，因为你进行了过柱实验，肯定有影响，结果不准确。

zxb597

2022-01-19

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温度，PH值等，可以用脱盐柱或是超滤的方法试试。

z流沙z

2022-01-19

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一个是可以超声，另外一个是梯度透析

ZZDX-YILILI

2022-01-19

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1.根据你的描述你的蛋白质在透析复性时出现沉淀，建议中间多加几个透析梯度，而且注意低温，这样有利于蛋白质的正确折叠。 2.透析袋本身有一定吸附能力，可以通过不断搅拌来降低吸附。 3.透析液PH越靠近蛋白质等电点越容易发生沉淀。

dxy_h7vcp8v3

2022-01-19

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其一，透析沉淀，可能是蛋白可溶性低然后透析时间过长，导致蛋白沉淀；建议，减少透析时间，透析时边透析边观察，发现出现沉淀立马停止透析其二，如果是换蛋白buffer的话，可以采用凝胶过滤层析或者超滤浓缩等方法。。最后，透析沉淀的蛋白质一般是不能进行后续实验了。实验前应该对蛋白样品进行离心，保证蛋白样品都是可溶性的活性蛋白。

dxy_w4oj7yoe

2022-01-19

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透析如果内外buffer差异比较大的话蛋白很容易沉淀，或者蛋白本身性质没那么好的话也是，可能直接用透析袋这个方法就不适合你的蛋白，如果一定要透析的话可以尝试多步透析，每次改变buffer的程度更小，比如梯度降盐。置换buffer的方法有很多，比如说过一个分子筛，浓缩置换buffer等等，不一定非要透析。另外，如果透析之后你的蛋白是不可溶的沉淀，那相当于变性了当然不能再去检测活性，如果是可逆沉淀也许还可以试一试

dxy_pni5ki46

2022-01-19

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透析过程溶液离子强度的改变会影响蛋白溶解度。沉淀中的蛋白一般都变性了很难去检测活性。可以参照包涵体去溶解复性

一支肾上腺素

2022-01-19

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首先一点要确定的是你的蛋白是不是真的复性成功了。因为如果没有复性成功的话，蛋白不稳定是非常容易沉淀的，你可以做一个副对照，就是加入所有条件，但是不加酶，同样的时间你看看是不是也有沉淀。然后在决定沉淀是不是因为酶切引起的。

jey1235

2022-01-19

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透析沉淀问题有很多，简单教一下： 1、buffer 的pH不要change太大，除非证明过稳定性 2、沉淀一般是盐浓度变化引起的，如果如果用来过离子柱，稳定的盐就能当作起始的盐浓度去过 3、可能是一个大量非特性结合核酸的蛋白，如果透析会打开核酸，暴露蛋白的疏水就沉淀了，建议破菌的时候加入核酸酶提前消化核酸 4、已经沉淀的蛋白直接重悬结构是错的，自然不能直接检测活性，除非经过复性。