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DNA 定点突变实验
DNA定点突变可用于:(1)研究蛋白质相互作用位点的结构、改造酶的不同活性或者动力学特性;(2)改造启动子或者DNA作用元件;(3)提高蛋白的抗原性或者是稳定性、活性、研究蛋白的晶体结构,以及药物研发、基因治疗等等方面。
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快速 PCR 定点突变实验
这种 PCR-SDM 方法的要点包括如下几个方面。1. 使用的模板浓度有所增加,这样就可以减少循环数,因此减少了非特异产物扩增的可能性。2. 加入了 Taq Extender, 扩增较长的 PCR 产物时产量和可靠性都有所提高。3. 使用 Dpm I 限制性内切酶,降低了母本分子的数量。4. 使用 Pfu DNA 聚合酶除去延伸出的碱基,提高了平末端连接的效率。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。
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DNA定点突变实验
的改变并没有引起相应氨基酸的改变,那么一般情况下也可以不去理它。另外,在NCBI上人类的基因的版本一直在变化,也就是说同一个基因有不同的版本,或者称不同的亚型,其碱基序列有些许的差异,只要自己克隆出来的碱基序列与其中一个相匹配,一般也就可以不做定点突变了。如果有时间没钱,那干脆重新PCR然后再克隆进自己的载体了,不过最好换个保真性好一点的酶如PFU,或者PCR循环数低一点,不过这些东西有时候也得靠运气啦。实在不行的话再来做定点突变。 对于第二种情况:这种情况下一般也就只能做定点突变了。 接下来开始聊
操作方法所属实验:DNA 定点突变实验
快速 PCR 定点突变实验
基因工程和蛋白质工程研究经常用到基因突变技术制备突变体,用于研究基因调控,表达和蛋白质的结构与功能。传统的用于研究蛋白质结构与功能关系的方法有两种:(1)对蛋白质一级结构的氨基酸残基侧链进行修改;(2)蛋白质晶体结构的X射线衍射。虽然这些方法能提供一定量的信息,但受到很多条件的制约,用途有限。如果采用定点突变技术在克隆DNA的预定位点导入突变,然后再适当的宿主细胞-载体系统中表达经改造的基因突变体,则可通过比较突变体蛋白与野生型蛋白的性质,鉴定出蛋白质的结构和生物学功能至关重要的结构域和个别氨
操作方法所属实验:快速 PCR 定点突变实验
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Quickchange-一步搞定基因定点突变引物设计!

为了研究某一基因的功能,我们通常不仅需要研究其野生型基因的功能,也需要进一步去挖掘它发挥作用时是哪一个结构域,甚至是哪一个氨基酸发挥了作用,而这里面就涉及到了如何设计定点突变引物的问题。今天为大家介绍一个在线网址—quickchange primer design,可以非常方便快捷为我们设计出合适的引物。网站链接:https://www.agilent.com/store/primerDesignProgram.jsp 该网站可以设计单点和多点突变引物以及删除或者插入一段 DNA 序列(插入

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【求助】基因定点突变

木瓜奶茶 请问基因定点突变能一次性突变两个基因吗?我准备把GAC突变成CAG。还是得一个一个地突变? zhujoker 单个可以,一起也可以的 木瓜奶茶 谢谢啊! ziyikeer 你是用试剂盒还是自己做啊?推荐一个试剂盒给你Easy Mutagenesis system。不过你要设计好引物,引物设计可以自己看说明书。 本文由丁香园论坛

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体外基因定点突变
体外基因突变技术分随机突变(random mutagenesis)和定点突变(site-directed mutagenesis)两类。定点突变常用技术包括:利用 M13 噬菌体进行体外基因定点突变、利用 PCR 进行体外基因定点突变
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致突变 PCR
致突变 PCR,是基于 PCR 技术在 DNA 序列中引入碱基突变或序列的插入和缺失的方法。致突变 PCR 可分为 2 种类型:构建突变体库的随机错掺 PCR 和定点突变 PCR,其中构建定点突变序列的方法主要包括重叠延伸 PCR 构建定点突变序列、大引物 PCR 构建定点突变序列、重组 PCR 构建定点突变序列和环状质粒 PCR 构建定点突变序列四种类型。
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🔥 DNA 定点突变
基因定点突变是指向目的 DNA 片段中插入、缺失或点突变一个或多个碱基以改变基因的序列,进而突变某个氨基酸。
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大引物 PCR 构建定点突变序列
大引物 PCR 构建定点突变序列只需要一个诱变引物,是目前以 PCR 为基础的诱变方法中最简单和经济的。
操作方法所属实验:致突变 PCR
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大肠杆菌glgC基因的克隆、序列分析与定点突变

名为glgC336。经I2-KI染色法鉴定,突变基因的表达可提高细菌中的糖原含量。关键词:AGPase; E.coli ; PCR;glgC基因;序列分析;定点突变Cloning And Site-directed Mutagenesis of glgC Gene From E.coli Y1090Dong Yunzhou Wang Xiaofeng Jia Shirong(Biotechnology Research Center, Chinese Academy of Agricultural

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自制全质粒定点突变

定点突变全质粒能生成与原始质粒略有不同的变异体。在这个视频教程中,我们将展示一种简单而合算的在质粒上引入碱基替换的方法。此方法只需要标准试剂,完全用不到昂贵的商品化试剂盒。1135_LaborTricks_1_P2.flv本视频来源于网络,如有异议请联系我们,我们将在5个工作日内作出处理。

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定点诱变实验
定点突变是指通过聚合酶链式反应(PCR)等方法向目的DNA片段(可以是基因组,也可以是质粒)中引入所需变化(通常是表征有利方向的变化),包括碱基的添加、删除、点突变等。定点突变能迅速、高效的提高DNA所表达的目的蛋白的性状及表征,是基因研究工作中一种非常有用的手段。
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聚合酶链反应构建重组 DNA
聚合酶链反应构建重组DNA用途广泛(1)用于测序引物(2)定点突变(3)核酸杂交探针(4)PCR引物。
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环状质粒 PCR 构建定点突变序列
环状质粒 PCR 构建定点突变序列,是指直接将全长双链质粒 DNA 以线性形式扩增,产生一种 DNA 双链上带缺口的突变质粒,该质粒经磷酸化后自身连接形成环状闭合质粒。
操作方法所属实验:致突变 PCR
重叠延伸 PCR 构建定点突变序列
重叠延伸 PCR 构建定点突变序列,是指在重叠延伸 PCR 中,两个重叠的 DNA 片段是分别从两个独立的 PCR 扩增反应得到的。混合两次 PCR 的产物,由于两个突变引物有重叠区,重叠片段之间退火、延伸成异源双链,加入外侧引物进行第三次 PCR,即可得到目标突变体。
操作方法所属实验:致突变 PCR
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