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快速 PCR 定点突变实验

实验分类:

PCR 技术

最新修订时间:

简介

这种 PCR-SDM 方法的要点包括如下几个方面。1. 使用的模板浓度有所增加,这样就可以减少循环数,因此减少了非特异产物扩增的可能性。2. 加入了 Taq Extender, 扩增较长的 PCR 产物时产量和可靠性都有所提高。3. 使用 Dpm I 限制性内切酶,降低了母本分子的数量。4. 使用 Pfu DNA 聚合酶除去延伸出的碱基,提高了平末端连接的效率。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。

来源:丁香实验

操作方法

快速 PCR 定点突变实验

一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂ATP(10 mmol/L)dNTP 溶液(包含所有 4 种 dNTP, 每一种 6.25 mmol/L)SDM 缓冲液,10X(20 mmol/L Tris-HCl、pH7.5,8 mmol/L MgCl2,40ug/ml BSA)2. 酶和酶缓冲液Taq DNA 聚合酶克隆化的 Pfu DNA 聚合酶(Stratagene)Taq Extender PCR 添加

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