快速 PCR 定点突变实验

PCR 技术

最新修订时间：2022-02-10

简介

这种 PCR-SDM 方法的要点包括如下几个方面。1. 使用的模板浓度有所增加，这样就可以减少循环数，因此减少了非特异产物扩增的可能性。2. 加入了 Taq Extender, 扩增较长的 PCR 产物时产量和可靠性都有所提高。3. 使用 Dpm I 限制性内切酶，降低了母本分子的数量。4. 使用 Pfu DNA 聚合酶除去延伸出的碱基，提高了平末端连接的效率。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。

来源：丁香实验

操作方法

快速 PCR 定点突变实验

一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂ATP(10 mmol/L)dNTP 溶液（包含所有 4 种 dNTP, 每一种 6.25 mmol/L)SDM 缓冲液，10X(20 mmol/L Tris-HCl、pH7.5,8 mmol/L MgCl2，40ug/ml BSA)2. 酶和酶缓冲液Taq DNA 聚合酶克隆化的 Pfu DNA 聚合酶（Stratagene)Taq Extender PCR 添加