聚合酶链反应构建重组 DNA

实验分类：

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

聚合酶链反应构建重组DNA用途广泛（1）用于测序引物（2）定点突变（3）核酸杂交探针（4）PCR引物。

来源：丁香实验

操作方法

基本方案

1. 制备模板DNA，如DNA不是经氯化铯梯度纯化的，100℃煮沸10 min 以灭活核酸酶。 2. 制备寡核苷酸引物，若PCR产物要进行平端克隆，就应该对引物的5'端羟基进行磷酸化处理。图一、用PCR反应引入单一的酶切微点和产生符合读码框架的融合蛋白。 3. 建立标准的扩增反应，以矿物油覆盖表面，在以下条件下进行20~25轮扩增循环：94℃变性1 min，50℃退火1