长成七朵太阳花
请问有战友做过PPARD的过表达吗?构建到pcDNA3.1-Myc载体后转染293T,以Myc标签抗体WB检测,表达量特别低。想请教大家,对于细胞核定位的蛋白过表达后也会定位在细胞核吗?
dxyc42u
对于细胞核定位的蛋白过表达后一般也会定位在细胞核的
土井挞克树
是的,如果过表达前定位在细胞核,那么过表达后大概率也是在细胞核内
huarenqiang5
细胞核定位的蛋白过表达后一般情况下都会定位在细胞核。
loveliufudan
对于细胞核定位的蛋白过表达后,它通常仍然会定位在细胞核中,除非发生了某种异常情况。然而,蛋白过表达后的细胞核定位可能受到多种因素的影响,包括转染效率、表达水平、细胞类型和实验条件等。
在你的实验中,如果你过表达的PPARD蛋白的表达量特别低,并且无法检测到预期的信号,可能有以下几个可能的原因需要考虑:
1. 转染效率:确保你的转染效率足够高,以确保大部分细胞成功表达过表达载体。优化转染条件,如使用合适的转染试剂和优化的转染时间。
2. 载体选择和构建:检查pCDNA3.1-Myc载体是否正确构建,以确保正确的插入序列和启动子。也可以尝试其他载体或表达系统,以提高表达效率。
3. 表达调控:PPARD的过表达可能受到内源性调控因子的影响。考虑使用更强的启动子或添加调控序列来增加表达量。
4. 蛋白稳定性:PPARD蛋白的稳定性也可能影响其表达量。考虑添加蛋白稳定性标签,如HA标签或Flag标签,以增加蛋白的稳定性。
另外,确保你的抗体检测方法和条件正确,包括适当的抗体浓度、特异性和检测系统的优化。
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