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CRISPR／Cas（clustered regularly interspaced short palindromic repeats／CRISPR-associated system）存在于大多数的细菌和几乎所有的古细菌中，是细菌在进化过程中形成的一种免疫防御机制，以帮助细菌抵御外来病毒和 DNA 的入侵。其中 Cas9（CRISPR-associated protein 9）具有用于基因操作的潜在可能。

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全基因组CRISPR-Cas9基因敲除和转录激活筛选实验

和协同激活介体 (SAM) 文库被用于鉴定敲除或激活后对 BRAF 抑制剂 vemurafenib 产生抗性的基因。目前，全基因组 CRISPR-Cas9 基因敲除和转录激活筛选实验主要有包括：设计自定义的 sgRNA 文库【方法一标准名称】、【方法二标准名称】和【方法三标准名称】。

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TALEN 结合核移植技术进行基因敲除

对于可以通过细胞核移植技术实现动物克隆的动物，比如猪、牛、羊等，虽然采用直接显微注射 TALEN mRNA 的方式可行，但是由于受精卵数目有限，这种方法并不是非常高效。通过 TALEN 与细胞核移植技术结合，可以高效地对这些动物物种进行基因敲除，甚至基因敲入等操作。大致的流程是先通过 TALEN 技术在这些动物的成纤维细胞上实现基因突变，如基因敲除或基因敲入，再将这些完成基因操作的细胞的细胞核，通过核移植转移到去核的卵母细胞中，最后再移植到动物母体的子宫发育成动物子代。

操作方法所属实验：TALEN 敲除基因

基于 CRISPR／Cas9 系统的动物基因敲除技术

CRISPR/Cas（clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated system）存在于大多数的细菌和几乎所有的古细菌中，是细菌在进化过程中形成的一种免疫防御机制，以帮助细菌抵御外来病毒和 DNA 的入侵。其中 Cas9（CRISPR-associated protein 9）具有用于基因操作的潜在可能。

操作方法所属实验：基于 CRISPR／Cas9 系统的动物基因敲除技术

问基因敲除后验证问题。

天一湖医者

首先你要考虑，你所加的抗性浓度是否足够，在你要做的细菌中的抗性浓度与所使用的浓度不是一致的。其次，你的自杀载体真的进去了吗，电转真的转化进去了。再者你要双交换或者单交换的同源区有多大呢，不同菌对同源区要求很不一样；

实验问答2 回答964 围观

问CRISPR/Cas9 基因敲除

loveliufudan

当设计CRISPR/Cas9基因敲除时，选择转录本是非常重要的。首先，需要考虑目标基因的功能，以确定要敲除哪个转录本。其次，需要考虑转录本的表达水平和分布，以确定是否能够有效地抑制目标基因的表达。NCBI和Ensemble是两个不同的数据库，可能存在数据不同的情况。在选择转录本时，应该查询多个数据库以确定转录本的准确性，并对所有结果进行评估。如果发现在NCBI上找到的最长转录本在Ensemble上没有，可以询问其他数据库或者通过实验来验证该转录本是否存在。

实验问答1 回答1447 围观

基因敲除技术

一．概述：基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA 同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展，除了同源重组外，新的原理和技术也逐渐被应用，比较成功的有基因的插入突变和iRNA ，它们同样可以达到基因敲除的目的。二．实现基因敲除的多种原理和方法：1．利用基因同源重组进行基因敲除基因敲除是80年代后半期应用DNA 同源重组原理发展起来的。80

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基因敲除技术

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基于胚胎干细胞同源重组的基因敲除技术

同源重组是遗传重组的一种类型，是指两条相似或相同的 DNA 链之间发生核酸序列的交换而引起 DNA 重新排列。这个过程包括 DNA 的断裂和重新连接等若干步骤。尽管同源重组常常对 DNA 双链的断裂起到修补的作用，但其也会介导减数分裂时染色体交换而产生重组 DNA。这些由于同源重组而产生的突变，是生物体适应环境变化的一种有效方式。基因敲除（gene knock-out）是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术，是一种定向改变细胞或者个体遗传信息的实验方法。它的产生和发展是建立在胚胎

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TALEN 敲除基因

与传统通过同源重组实现基因敲除方法不同，利用 TALEN 技术是通过 NHEJ 修复方式进行模式动物的靶向基因敲除，不需要进行 ES 细胞的操作。只要将 TALEN 的 mRNA 显微注射到模式动物受精卵中，可实现直接基因敲除。由于不同的模式生物，铺助生殖技术的不同，使用 TALEN 敲除基因的方法也有所不同。主要是下面两种方式：①受精卵显微注射 TALEN mRNA 敲除基因；②TALEN 结合核移植技术或 ES 细胞进行基因敲除。

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基于胚胎干细胞同源重组的基因敲除技术

操作方法所属实验：基于胚胎干细胞同源重组的基因敲除技术

TCR人源化动物模型

（一）HLA人源化小鼠自1981年转基因技术发明后不久,第一代HLA转基因小鼠就诞生了。这一代HLA转基因小鼠使用人类的HLA-A2或HLA-B27分子,小鼠的MHCI类分子没有敲除。研究发现小鼠T细胞偏向使用小鼠的MHC分子如Db和Kb分子；病毒感染时,只产生H2限制的CTL反应。第二代HLA转基因小鼠用HLA和CD8双转基因,或将HLA的α3置换为小鼠的α3(A2/Db,A2/Kb),以匹配CD8分子。第三代HLA转基因小鼠(HHDII)除了有A2/Db转基因，还用基因敲除的方法去除小鼠

操作方法所属实验：TCR人源化动物模型

问海分枝杆菌基因敲除求助

loveliufudan

可能存在以下问题：质粒转化效率不够高：您可以尝试优化电转条件，比如改变电压、时间、质粒浓度等因素，提高转化效率。质粒没有成功复制到海分枝杆菌细胞中：您可以通过PCR、测序等方法验证是否成功转化并复制到细胞中。质粒中的基因敲除片段没有被正确插入到海分枝杆菌基因组中：您可以使用PCR、测序等方法验证基因敲除是否成功，或者考虑使用其他敲除策略。海分枝杆菌中可能存在其他β-galactosidase酶或其他因素影响染色体插入物的表达或功能，您可以通过文献调研或实验验证这些因素是否存在。

实验问答2 回答388 围观

问关于基因敲除鼠的RNA-seq结果

bamboopiggy

应该是敲除鼠的A基因检测不到才对，否则就是seq出问题了。

实验问答1 回答385 围观

基因敲除的原理与方法

相关专题 基因敲除可以说是基因组学、细胞分离培养以及转基因技术的组合。那么基因敲除的原理是什么呢？ 基因敲除的方法有哪些呢？在此，做个小结，以供大家学习。一.概述： 基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA 同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展，除了同源重组外

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如何设计条件性基因敲除小鼠模型

小鼠和大鼠可谓是生命科学实验室里的明星，成功的小鼠和大鼠模型可谓是「生命科学的好帮手」。很多人想自己设计或是了解条件性基因敲除小鼠，此文供参考。条件性基因敲除小鼠的设计利用了 Cre/LoxP 或 Flipe/Frt 原理。它们都是位点特异性重组酶系统。这里以 Cre/LoxP 系统为例。比如在待敲除的一段目标 DNA 序列的两端各放置一个 loxP 序列，得到 flox(flanked by loxP) 小鼠。将 flox 小鼠与带有细胞特异性表达 Cre 的小鼠交配繁殖，以获得在特定

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脊髓损伤后的运动功能学评价实验

脊髓损伤后的运动功能学评价实验用于：（1）用于评价药物、创伤对动物运动功能恢复的影响；（2）对转基因或基因敲除动物表型的鉴定。

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细胞伤口愈合实验

细胞伤口愈合实验被研究者广泛应用和改进，用来研究各种实验条件比如基因敲除和化疗在细胞迁移和增殖中的作用。该实验的优势在于（1）操作简单（2）费用廉价（3）实验条件容易根据不同的目的改进。

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2型糖尿病模型

2型糖尿病模型，GK／IRS-1双基因敲除小鼠，IR+/-／IRS-1+/-双基因敲除杂合体小鼠，IRS-2-/-小鼠均为较成功的2型糖尿病动物模型。

操作方法所属实验：转基因技术糖尿病动物模型

人源化抗体转基因小鼠模型

首先利用基因打靶技术分别培育出免疫球蛋白重链和轻链基因敲除小鼠,再利用转基因技术培育出转人免疫球蛋白重链和轻链的转基因小鼠。最后将上述小鼠进行杂交,通过基因检测和抗体表达类型检测筛选出敲除了小鼠内源性抗体重链和轻链基因同时导入了人免疫球蛋白重链和轻链基因的小鼠，即为人源化免疫球蛋白转基因小鼠。制备人源化抗体转基因小鼠与制备常规基因敲除和转基因小鼠技术类似，不同之处在于为保证抗体的多样性，需要尽可能导人完整长度的人免疫球蛋白基因。而人免疫球蛋白重链和轻链基因的各个基因座都长达1000 kb左右

操作方法所属实验：人源化抗体转基因小鼠模型