TALEN 敲除基因

实验动物

最新修订时间：2022-02-10

简介

与传统通过同源重组实现基因敲除方法不同，利用 TALEN 技术是通过 NHEJ 修复方式进行模式动物的靶向基因敲除，不需要进行 ES 细胞的操作。只要将 TALEN 的 mRNA 显微注射到模式动物受精卵中，可实现直接基因敲除。由于不同的模式生物，铺助生殖技术的不同，使用 TALEN 敲除基因的方法也有所不同。主要是下面两种方式：①受精卵显微注射 TALEN mRNA 敲除基因；②TALEN 结合核移植技术或 ES 细胞进行基因敲除。

来源：丁香实验团队

操作方法

受精卵显微注射 TALEN mRNA 敲除基因

对于小的模式动物，如小鼠、大鼠、斑马鱼，由于采集受精卵数目多，可以采用显微注射 TALEN mRNA 方法到动物的受精卵中实现全身基因敲除。对于猴子、树驹等不可大规模获取卵巢、采集卵母细胞的非经济动物，也可采用显微注射 TALEN mRNA 方法敲除基因。大致步骤为先以 TALEN 质粒为模板，体外转录出 mRNA，再显微注射 TALEN mRNA 到受精卵中。

TALEN 结合核移植技术进行基因敲除

对于可以通过细胞核移植技术实现动物克隆的动物，比如猪、牛、羊等，虽然采用直接显微注射 TALEN mRNA 的方式可行，但是由于受精卵数目有限，这种方法并不是非常高效。通过 TALEN 与细胞核移植技术结合，可以高效地对这些动物物种进行基因敲除，甚至基因敲入等操作。大致的流程是先通过 TALEN 技术在这些动物的成纤维细胞上实现基因突变，如基因敲除或基因敲入，再将这些完成基因操作的细胞的细胞核，通