实验小助理静静
做敲除用的是infusion的方法将上下游同源臂和抗生素连在一起,电转化到菌株里后,在抗生素培养基中有长!但是菌液pcr验证敲掉部分也跑出条带了(敲掉部分设计引物)!想知道为什么敲除失败,在抗生素中也可以长?敲除后菌株是长得很慢吗?等待菌株长出来过程是否要补加抗生素呢??
希望有经验的前辈指点一下,谢谢大家!!
天一湖医者
首先你要考虑,你所加的抗性浓度是否足够,在你要做的细菌中的抗性浓度与所使用的浓度不是一致的。其次,你的自杀载体真的进去了吗,电转真的转化进去了。再者你要双交换或者单交换的同源区有多大呢,不同菌对同源区要求很不一样;
bamboopiggy
你这个可能是敲入了一个allel,没有敲掉另外一个,建议pcr找全敲掉的,另外抗生素可以补加