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专题封面
免疫组化(IHC)
专题61 内容  1332 订阅
免疫 PCR
免疫PCR (Immuno PCR, Im-PCR) 是利用抗原抗体反应的特异性和PCR扩增反应的极高灵敏性而建立的一种微量抗原检测技术。是用一段已知DNA分子标记抗体作为探针,用此探针与待测抗原反应,PCR扩增粘附在抗原抗体复合物上的这段DNA分子,电泳定性,根据特异性PCR产物的有无,来判断待测抗原是否存在。
实验概况收录 1 操作方法 · 1 相关问答 · 3 相关文章
免疫印迹与免疫检测实验
免疫印迹(常称之为Western印迹),可用于检测单克隆或多克隆抗体识别的抗原。
实验概况收录 6 操作方法 · 3 相关问答 · 3 相关文章
免疫PCR
一、制备生物素化DNA 将噬粒 BLuescript skt,用生物素标记的M13引物进行PCR扩增制备出含T3和T7引物序列的280 bp DNa段,即为生物素化DNA。 二、免疫PCR模式 1.  试剂 包被缓冲液:20 mmol/L Tris-HCI(pH9.5),含150 mmol/L NaCl和0.02%NaN3; 洗涤液:20 mmol/L Tris-HCI(pH7.5),含150 mmol/LNaCl 0.1 mmol/L EDTA和0.1%Tween20; 稀释液:20
操作方法所属实验:免疫 PCR
免疫电泳
1.  取载物玻片(7.5ⅹ2.5厘米)加上3.5毫升1.5%琼脂凝胶,制成2毫米厚的琼脂板。2.  按图位置,在琼脂板未凝固时,放入抗血清槽铸型,注意勿使铸型全部浸入琼脂中,待凝固时再打孔。3.  加待检标本:用微量进样器往孔中加1~5微升。4.  电泳:电压9~7伏/厘米,泳动15~20小时。5.  电泳后取出抗血清槽铸型,加入抗血清,进行双扩散,一般在24小时内沉淀弧出全。6.  观察结果:或描绘、拍照或进行染色,染色后的标本便于结果分析及保存。图1 免疫电泳抗原孔和抗体槽位置示意图
操作方法所属实验:免疫电泳实验
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免疫沉淀原理

IP是利用抗原蛋白质和抗体的特异性结合以及细菌蛋白质的“protein A/G"特异性地结合到抗体(免疫球蛋白)的FC片段的现象开发出来的方法。目前多用protein A/G预先结合在argarose beads上,使之与含有抗原的溶液及抗体反应后,beads上的prorein A/G就能达到吸附抗原的目的。通过低速离心,可以从含有目的抗原的溶液中将目的抗原与其它抗原分离。 免疫沉淀实验的操作步骤比较多,同时由于在非变性条件下进行实验,所以要得到一个完美的实验

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Science:从娘胎带来的免疫记忆!后代的肠道免疫力可以被

研究背景免疫系统的一个基本特性是它能够形成对感染的免疫记忆,从而提高在后续感染中的反应能力。免疫记忆最初被描述为获得性免疫系统的特性,但越来越多的证据表明先天免疫系统可能也同样存在免疫记忆,即在出现炎症或受到感染时能够发展出针对相似「遭遇」的反应能力,这种现象被称为「训练免疫」。组织干细胞可以产生对先前炎症反应的记忆,从而在遇到相似情况时能够快速做出反应。先天印记通常是短暂的,通常持续数周至数月。然而,一些针对无脊椎动物的研究表明,来自上一代的免疫经验可以传递到子代中去,这种现象也被猜测可能

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专题封面
免疫相关动物模型
专题46 内容  114 订阅
免疫纯化实验
在蛋白质纯化方法中抗体亲和纯化是非常有效的方法之一。仅此一步常可获得 1000~10 000 倍的纯化。如果抗体与目的蛋白的结合的特异性得到证明,并且洗脱的目的蛋白没有受到不可逆的损伤,那么可以认为免疫纯化是极好的蛋白质纯化方法,特别是用在纯化过程的最后步骤。来源:《蛋白质技术手册》
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免疫电泳实验
免疫电泳(immunoelectrophoresis) 技术是基于抗原的电泳迁移以及与抗体的专一性免疫亲和或沉淀反应来鉴定其强度和特异性。在大部分电泳中,样品中的抗原通过含有相应抗体的 pH 8.6 的薄层琼脂糖凝胶,抗原在 pH 8.6 时通常带强负电,与在含有抗体的凝胶中电泳时发生免疫反应。本实验来源「蛋白质电泳实验技术」主编:郭尧君。
实验概况收录 5 操作方法 · 2 相关问答 · 3 相关文章
免疫纯化法
制备免疫亲和柱要求抗体首先共价结合到介质上。另一方法是将抗体结合到蛋白 A 或 G 小珠上,再用交联剂固相化。后一方法由于蛋白 A 或 G 结合在杭体的 Fe 区, 所以结合抗原的部位获得充分暴露,从易于接近。免疫亲和柱制备完成后,抗原溶液即可以上样,接着洗去污染物,然后洗脱抗原。如果不能利用特异的配基破坏抗原抗体之间的相互作用来洗脱,只好釆用非特异洗脱方法。但是非特异洗脱方法一定要小心应用,以免目的蛋白失活。单克隆抗体通常在免疫亲和纯化中比多克隆抗体更有用。单抗代表与目的蛋白具有单一特异结合部位的均一抗体,因而它的结合是确定一致的。洗脱也如此,因为只需破坏单一类型的相互作用就能释放目的蛋白。应当说,多克隆抗体在亲和纯化中也是可用的,特别是用很纯的抗原免疫动物产生的多克隆抗体。总之,进行有效的免疫纯化的主要关键是获得特异抗体,它与底物之间具有 YI 一定强度的亲和结合力。该强度的结合力一方面可以在洗柱过程中保持底物蛋白仍然结合在柱上,不被洗脱;另一方面又不至于结合太紧难以洗脱,采用极端洗脱条件而造成底物蛋白变性。所以选择用于免疫纯化的抗体的方法应是试验一组单克隆抗体,挑选不仅具有足够的亲和结合力,而且还能洗脱下完整抗原的抗体。免疫纯化的质量取决于抗体溶液的纯度。制备免疫亲和柱使用的抗体既要具有前面提到的特性,又要尽可能的纯。免疫亲和柱的制备是相当昂贵的,其结合容量却相对较低,常常每 ml 介质结合到 1 mg 抗原。因此为了节省和提高效率,经常制备的是小而粗的柱子,同时在亲和纯化步骤里要求样品溶液重复几次上样,以便纯化更多的抗原蛋白。此外,较小的柱子也可以减少和限制柱污染或蛋妇酶灭活造成的抗体丢失。免疫沉淀也可看作另一类型的免疫和纯化。还有一个类型是反向免疫纯化,它利用抗体柱除去溶液中特异的污染物一抗原。
操作方法所属实验:免疫纯化实验
免疫电泳试验
观察并描记沉淀弧的数目、位置及形状,参照免疫球蛋白迁移范围示意图(图4-14),识别主要Ig。
操作方法所属实验:免疫电泳试验
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免疫记忆是适应性免疫的特征

1.记忆细胞来自抗原选择下发生扩增的淋巴细胞克隆 只有克隆选择学说而非侧链理论才可以解释免疫记忆现象。这是因为发生克隆扩增的淋巴细胞可以长期存活,而脱落下来的受体和抗体分子寿命很短。可见经历抗原克隆选择而留下的记忆细胞必然显示抗原特异性,这是牛痘疫苗可以预防天花却不能保护人体免受其他疾病侵扰的原因。在这个意义上,免疫记忆只出现在由淋巴细胞介导的适应性免疫应答,是免疫系统进化至高级阶段所展示的重要特点。 二次记忆性应答的产生取决于原先致敏抗原的再现。因而,如前所述,适应性免疫显示

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免疫细胞

免疫细胞中,执行固有免疫功能的细胞:吞噬细胞、NK细胞等。执行适应性免疫功能:T、B淋巴细胞,还有APC细胞参与。 一、淋巴细胞 淋巴细胞分为B细胞和T细胞,分别来源于骨髓和胸腺B淋巴细胞 表面的BCR(mIg)及分泌的抗体均为免疫球蛋白。由B细胞介导的免疫称为体液免疫T淋巴细胞 ,TCR为双链分子。细胞毒性T细胞、调节性T细胞(Tr)(辅助性T细胞和抑制性T细胞)1.T淋巴细胞(T细胞) 胸腺依赖性淋巴细胞(thymus- dependent lymphocyte

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专题封面
WB(蛋白免疫印迹)
专题86 内容  5386 订阅
免疫组化
免疫组化(Immunohistochemistry, IHC)是应用免疫学基本原理--抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理。通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术(Immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(Immunocytochemistry)。
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