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简介
在蛋白质纯化方法中抗体亲和纯化是非常有效的方法之一。仅此一步常可获得 1000~10 000 倍的纯化。如果抗体与目的蛋白的结合的特异性得到证明,并且洗脱的目的蛋白没有受到不可逆的损伤,那么可以认为免疫纯化是极好的蛋白质纯化方法,特别是用在纯化过程的最后步骤。
来源:《蛋白质技术手册》来源:丁香实验
操作方法
1. 5~10 倍柱体积的起始缓冲液,如磷酸缓冲盐液(PBS)洗柱;2. 3~5 倍柱体积的冼脱缓冲液,如 0.1 mol/L,pH 2.5 glycine-HCl 洗去污染物;3. 5~10 倍柱体积的起始缓冲液平衡柱;4. 通过透析、凝胶过滤、加 1/10 体积 10× 起姶缓冲液至样品液等方法用起姶缓冲液平衡样品。样品需事先 100 000×g,离心 30 min 或经 0.22 um 滤膜