免疫组化（IHC）

目前免疫组化多选用 SABC 法。一抗是特异性的针对检测蛋白的单克隆或多克隆抗体（本实验为兔抗大鼠 iNOS ）。二抗是生物素标记的针对一抗的抗体（本实验为羊抗兔 IgG ）。三抗是针对生物素的链霉亲和素-过氧化物酶复合物（streptavidin biotin complex，SABC）。这样就可以通过逐级放大的方式，以过氧化物酶标记要检测的蛋白（iNOS）。显色液为二氨基联苯胺（DAB）和双氧

SPA 除与标记物结合后用于代替第二抗体外，其本身可作为桥抗体用于 PAP 染色。与标记 SPA 相似，SPA 可与多种动物的第一抗体反应外，还可与多种 PAP 复合物反应，而不像 PAP 法需要与第一抗体相同的动物制备的各种 PAP 复合物。由于 SPA 与 Fc 段和 Fab 段结合为亲和化学反应，不是抗原-抗体的免疫反应，因而反应极为迅速，能大大减少实验时间。此法的敏感性不如 PAP 法，但

免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）是以免疫学的抗原-抗体反应为理论基础，使用标记的特异性抗体，在细胞组织中检测和定位抗原（例如蛋白质）的技术。这种方法利用了抗体与抗原之间的特异性结合。在阳性杂交瘤的筛选中，IHC 可以用来确定杂交瘤细胞是否产生了目标抗体。

免疫细胞化学与免疫细胞荧光两者实现的实验目的相似，但各有优缺点方法比较方法优点缺点免疫细胞化学样品可长期保存一次只能标记一种蛋白免疫细胞荧光步骤较简单，可同时标记不同蛋白，图片观赏性强样品保存时间较短

APAAP（Alkaline phosphatase-anti-alkaline phosphatase technique）技术的基本原理为：抗鼠IgG抗体作为桥梁，将鼠源性识别细胞抗原的第一抗体与鼠源性的抗碱性磷酸酶单克隆抗体-碱性磷酸酶复合物相连接，使之成为Ag，-Ab1－Ab2-anti AP-AP的复合物。还可通过二抗将APAAP 复合物重复叠加起来，从而使多个碱性磷酸酶标记于组织细胞上

1. 洗载玻片： 将载玻片置于重铬酸钾和浓 H2SO4 混合液中， 目的是为了是载玻片上的硅胶等除去， 同时使一些肉眼看不见的凹凸不平的表面变平整， 便于组织吸 附， 然后置于清水中清洗， 除去残余的重铬酸钾和浓 H2SO4（大约冲一个小时左右）， 再将载玻片浸泡于酒精之中， 然后放到架子上， 置于 37 °C 温箱中，将多聚赖氨酸涂布于玻片的表面，由于 Lys 带正电，而大多数的组织带负电荷，从

通过特异的抗原抗体反应标记上可见的显示物系统来检查细胞及组织上原位抗原或抗体成分的方法。在光学显微镜、荧光显微镜或电子显微镜下观察其性质定位，还可以利用细胞分光光度计、图像分析仪、共聚焦显微镜等进行细胞原位半定量测定。免疫组织化学的显著特点是特异性强。

对于癌症病变的组织学分析，在早期可以通过5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）掺入测定目的细胞的增殖能力，如胃上皮增殖及肠道干细胞向上增殖能力，推测其转化的可能性。由于BrdU掺入受到剂量和时间的影响，也可以使用增殖相关核抗原进行免疫荧光或组化评价组织的增殖情况，如PCNA或Ki67。

根据聚合酶技术把辣根过氧化物酶抗鼠或/和抗兔IgG分子结合在多聚酶上形成多聚物分子,其与待检的抗原特异性的结合后，加入底物显色。

冰冻切片是指将组织在冷冻状态下直接用切片机切片。它实际上是以水为包埋剂，将组织进行冰冻至坚硬后切片的。在冰冻切片前组织不经过任何化学药品处理或加热过程，大大缩短了制片时间。同时，由于此法不需要经过脱水、透明和浸蜡等步骤，因而较适合于脂肪、神经组织和一些组织化学的制片，并作为快速切片的方法应用在临床诊断。

一、材料 1. 缓冲液、溶液和试剂 丙酮 蒸馏水 干冰 磷酸盐缓冲液（PBS) Tek OCT 组织复合物（Sakura FinetekUSA，Torrance，CA) 2. 特殊设备 封闭容器 烧杯 恒冷装置 解剖工具 平盘 可以削去的一次性组织模子（Pelco International，Redding，CA) 普通的无粘片剂的载玻片 Sakura 刀片（IMEB

1. 用剃须刀片将含样品的蜡块切成梯形，小心切去多余石蜡，勿太接近包埋样品（否则样品可能遭损坏或致蜡块破碎）。 2. 将梯形蜡块宽边面向刀片置于切片机固定夹上进行切片。切成8 μm 厚。 图一、石蜡切片在明胶浸泡过载玻片上的放置 3. 加1滴0.2×明胶浸泡液于明胶浸泡过的载玻片上，用细毛刷将切片成排放在液滴上（根据样品大小，可放多至10张切片）。 4.

免疫组织化学简介免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应炕原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜 （包括荧光显微镜、电子显微镜）的显像和放大作用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质 （如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等）。