免疫电泳实验

1. Tris-巴比妥缓冲液贮液 2.24 g 二乙基巴比妥酸，4.43 g Tris，0.053 g 乳酸钙，0.065 g 叠氮钠，用双蒸水溶解后，在容量瓶中定容至 100 ml。 2. 电极缓冲液 用双蒸水稀释 4 倍。 3. 1% 琼脂糖溶液 选择合适电内渗的琼脂糖，为避免它水化时成团，常将琼脂糖粉撒在上述配制的缓冲液上，煮沸溶解，在 90℃ 水浴上加热，搅拌，直至溶液转为透明。

为使琼脂糖溶液均匀铺层和得到重复的结果，玻璃板必须水平放置。 为便于在免疫电泳中从第一向到第二向的转移，最好使用琼脂糖凝胶支持膜。12 ml 琼脂糖溶液在 84 cm X 94 cm 上的凝胶厚度为 1.5 mm。倒胶后约 3 分钟凝固。待其冷却到室温后，把它放在保湿盒中，使用前在冰箱中放 1 小时，这样可以使凝胶强度增加，防止凝胶破碎。

打孔器直径可为 2.0 mm、2.5 mm、4.0 mm，相应于 1.5 mm 厚度凝胶的样品体积为 2 μl、5 μl 和 10 μl。 最佳加样量为 1~15 μl。加样时，针要插入孔中的所有方向，以防止空气在加样孔中的 “座垫” 作用而使样品溢出凝胶表面。

电泳时温度可控制在 10~15℃，同前述电泳的方法一样，先在冷却板上铺一层煤油，再铺胶。电极芯与凝胶的边缘接触 5~10 mm，并保持平行，电泳时的电场强度约为 20 V/cm。

如用考马斯亮蓝染色，先用生理盐水洗去没有反应的蛋白。为了加速染色步骤，将凝胶压干。（将凝胶放在玻璃板上，先用蒸馏水湿润。在小孔中注入双蒸水，以防止凝胶压扁时，小孔中的空气使凝胶破裂。用一张湿滤纸和 5 张干滤纸盖在上面。再在上面放一块玻璃板和压 1 kg 重物。3 分钟后，用 5 张干滤纸换上面 5 张湿滤纸，重复两次这样的过程，小心地除去所有的滤纸。）用 0.1 mol/L 氯化钠溶液洗 20