免疫电泳实验

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免疫电泳（ immunoelectrophoresis ）是将电泳和琼脂扩散结合起来，用于分析抗原 组成的一种定型方法，具有灵敏快速的优点。该实验可分为如下两个步骤（图 6-1 ）：

　1. 电泳 将待检的可溶性物质在琼脂 板上进行电泳分离。由于各种可溶性蛋白分子的大小、质量与所带电荷不同，在电场的作用下，其带电分子的运动速度具有一定的规律，因此通过电泳能够把混合物中的各种不同成分分离开。

　2. 琼脂扩散 电泳后在琼脂槽中加入相应抗血清，然后置湿盒内进行双扩散。当抗原与抗体相遇且比例适合时，可形成不溶性复合物，出现特异性沉淀线，根据沉淀线的数量和位置，可鉴定分析各种抗原成分及其性质。

　【材料】

　1. 抗原：正常人血清；抗体：兔抗人血清。

　2. 1% 离子琼脂（用离子强度 0.05 、 pH8.6 的巴比妥缓冲液配制）。

　3. 载玻片、直径 3mm 的打孔器、 2 × 6 × 6 聚苯乙烯塑料条、微量加样器、电泳仪 、吸管等。

　【方法】

　1. 制琼脂板 载玻片放于水平台面上，将塑料条放置于玻片中央，吸取 4ml 热熔的 1% 离子

　琼脂于其上，待凝固后，取出塑料条，即制成琼脂槽。再按图 6-2 打孔。

　2. 加样 用微量加样器往孔中加正常人血清。

　3. 电泳 电压 4V/cm ，电泳 1.5 小时。

　4. 琼脂扩散 在琼脂槽内加入兔抗人血清，使其充满槽内，置湿盒内 3 7 ℃ 扩散 24 小时，观察结果。

　【结果观察】

　在琼脂槽的两边出现相对称的弧形沉淀线。

　【注意事项】

　1. 电泳扩散后可直接在黑色背景下，用斜射光观察。

　2. 电泳时，搭桥应完全紧密接触，以免因电流不均而发生沉淀线弯曲。

　【作业】

　1. 绘琼脂板上弧形沉淀线图。

　2. 为什么免疫电泳法比免疫琼脂双向扩散法灵敏？

图 6-1 免疫电泳的原理和步骤

 

图 6-2 免疫电泳槽和加样小孔