免疫电泳试验

免疫电泳试验是凝胶电泳与双向免疫扩散相结合的免疫化学技术。应用琼脂进行免疫电泳试验可分为以下二个步骤：

1.琼脂电泳  将待检的可溶性物质在琼脂板上进行电泳分离，由于各种可溶性蛋白分子的颗粒大小、质量与所带电荷不同，在电场的作用下，其带电分子的运动速度（迁移率）具有一定规律，因此通过电泳能够把混合物中的各种不同成分分离开来。以血清为例(图4-12A)，电泳后各种成分的位置是电泳速度与电渗速度的代数和。白蛋白分子量较小，所带负电荷较强，泳动最快，依次为α1、α2及β球蛋白，γ球蛋白泳动最慢。

2．琼脂扩散  当电泳完毕后，在琼脂板一端挖一条长的槽，加入相应抗血清，置湿盒内让其进行双向扩散。在琼脂板中抗原和抗体互相扩散，当两者相遇且比例适合时，可形成不溶性抗原抗体复合物，出现乳白色的特异性沉淀弧线（图4-12B、C)。

待检血清
巴比妥缓冲液 人IgG 兔抗人血清抗体
琼脂 载玻片 打孔器 电泳仪 电泳槽 万用电表

1. 琼脂板的制备  将洁净之载玻片置于水平台面上，用吸管吸取 4ml1.2%热溶的琼脂于载玻片上，待凝固后按图4-13打孔及开槽。

2. 加样  挑去孔中琼脂,用微量加样器于上孔加待检血清15μl，下孔加IgG溶液(lmg/ml)15μl。

3. 电泳  置电泳槽中，用三层纱布作电桥，将近孔的一端连接阴极，另一端接阳极，以端电压6V/cm电泳1~2h。

4. 扩散  电泳后挑去长槽内琼脂，用热溶的1.2%琼脂封底。然后于槽中加入兔抗人血清抗体，置湿盒内，于37℃温箱中扩散24h，连续观察结果，至沉淀弧线完全清晰为止。

1. 操作时动作要迅速小心，挖槽时要注意平行整齐，加入抗体不要外溢。

2. 抗原抗体比例要适合。

3．对分子量过小的抗原（如游离Ig轻链）要随时观察结果。

4. 有时抗原抗体反应形成的沉淀线很弱，肉眼不易观察，可以染色。

观察并描记沉淀弧的数目、位置及形状，参照免疫球蛋白迁移范围示意图（图4-14），识别主要Ig。