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科研学霸天团,48小时有问必答
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腺病毒不够用?需要重新包毒吗?
huarenqiang5
这个建议重新进行包装比较可靠。
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问
慢病毒感染效率低是否可以二次感染呢?
dxyc42u
对于难转染细胞可以使用二次转染的
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问
如何提高病毒对细胞的感染效率?
huarenqiang5
1.建议提前一天将细胞种植在24孔板中,以感染时细胞融合度在50%左右为宜。2.适当减少感染时的细胞培养基量可以增加感染效率,但也可能增加细胞毒性。如出现细胞毒性可增加培养基量或更换培养基。
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问
要曝光很长时间才能观察到荧光,原因是什么?
谦谦千千
可能是染的荧光比较弱,表达量低;也有可能是在染荧光后没有使用荧光淬灭剂,荧光淬灭了;还有可能是拍的时间太久,导致荧光淬灭。
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问
为什么过表达病毒比对照的荧光要暗?
dxyc42u
考虑与病毒插入基因组位点不同导致的
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问
细胞能被病毒感染,但为何GFP荧光很弱?
dxyc42u
可能是感染时病毒加入量有点少的原因
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问
对照病毒或目的病毒感染细胞以后,细胞形态发生改变或者细胞死亡?
dxyc42u
这种情况很可能是病毒加入太多了,建议减少病毒加入量
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问
感染悬浮细胞或半悬浮细胞时,没有平角离心机怎么办?
王堇文
准备干净的10ml 15ml离心管,转移进离心管进行离心就好
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问
什么是MOI?
凌晨三点Dxy
*MOI是感染复数(Multiplicity of Infection)的缩写*。感染复数(MOI)是病毒学和微生物学中的一个重要概念,它代表了在实验条件下,用于感染宿主细胞的病毒颗粒数量与宿主细胞数量的比值。这个比值可以用来预测感染的效率,以及每个细胞平均被多少个病毒颗粒感染。通常,MOI的值越高,意味着每个细胞被多个病毒颗粒感染的可能性越大,这可能导致更高的病毒整合到宿主细胞染色体的概率,
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问
病毒使用过程中如何进行稀释?
sswei
需要稀释病毒时,将病毒从-80℃冰箱中取出,置于冰上溶解,然后用PBS或培养基(不含血清)稀释到所需浓度后轻柔混匀,尽快使用。
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问
收到病毒后如何保存?
dxyc42u
收到病毒负八十保存,避免反复冻融,溶解后四度保存,可以用一周
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问
如何确定向细胞中加入病毒的最佳时间?
dxyc42u
生长旺盛的细胞提前一天铺板后就可以接种了
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问
用于病毒感染的细胞接种量是多少?
dxyc42u
这个可以做预实验摸索,每种细胞都不一样,我养的细胞24孔板接种0.5x10五次方
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问
慢病毒载体和腺病毒载体,该怎么选?
sswei
慢病毒载体对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力,携带外源基因的慢病毒载体在包装质粒、细胞系的辅助下,包装成有感染力的病毒颗粒,通过感染细胞或活体组织,实现外源基因在细胞或活体组织中表达。利用慢病毒载体,可研究启动子调控、过表达特定基因或沉默特定基因(RNAi)等。腺病毒载体(Adenoviral Vector)是以目前常用的人类腺病毒5型(基因组是一个线性的36kb dsDNA分子)为基础发展起来
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问
SDS-PAGE蛋白电泳实验,设置同样的电压,但是不同时间做,电流相差很大,有时不出带,为什么会出现这种情况?如何消除?
FrEShAIFE
可能和你电泳液的新旧程度有关。内槽放新配置电泳液,外槽放旧液。而且不出条带的话,也有可能是转膜的问题,转膜的时候也要关注电流电压的大小。
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问
进行ITPG诱导实验时,为什么需要做对照实验?
毛利小五郎的徒弟
对照的目的是为了说明ITPG的诱导作用,排除体系中其他诱导因素
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问
截短质粒做co-ip有没有可能出现所有截短都能够拉到目的分子,如果出现了可能的原因是什么。
dxy_mqg1dtg8
这可能是由于以下原因:1. 共价交联:共价交联是指两个或多个蛋白质之间形成的共价键。如果截短质粒上的区域包括两个或多个蛋白质之间的交联位点,则所有截短都可能与目的分子相互作用。2. 不完全截短:如果截短质粒没有完全截短,也可能导致所有截短都能够拉到目的分子。这可能是由于截短质粒的设计存在问题,例如设计的引物不准确或控制序列没有完全删除。3. 结构域与目的分子的接口:如果截短质粒上的结构域与目的分子
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问
慢病毒感染THP1细胞,感染效率鉴定不出来了怎么办
dxyc42u
有可能是嘌呤霉素浓度高了之后病毒感染过的细胞杀死了,毕竟感染过的细胞没有未感染的细胞耐受
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问
自噬蛋白LC3的正确写法?
dxyc42u
这三个区别是LC3A、LC3B和LC3C是LC3的三种亚型,LC3-I和C3-II是LC3在细胞不同部位剪切而来。这几种都是正确写法,具体看你研究的方向。
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问
WB按照常规操作,最后显影出现白板是为啥?
dxyc42u
不排除是发光液的问题,换个发光液试试
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