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WB按照常规操作,最后显影出现白板是为啥?

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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实验是个狗

按照常规进行操作,抗体之前用过,没有问题,试剂都是用的之前用过的货号,提完蛋白进行浓度检测也还不错,最后显影没有任何条带,这是为啥?

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4 个回答

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dxyc42u

有帮助

不排除是发光液的问题,换个发光液试试

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feixue7758527w

有帮助

这个原因很多,你只能看看最后显影剂如何,我之前很多都是显影剂的,当然也要排除转膜情况。还有一个情况就是不要切胶试试。

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土井挞克树

有帮助

白板:“白板”代表的意义是某些条件不足:


① 首先要考虑蛋白提取问题,样本浓度是否过低,正常Western实验每孔需要20-40μg左右的蛋白;


②一抗的稀释比例,一般新手做WB都会按照说明书的比例去做,一般说明书都是1:500-2000之间的比例,如果是白板就需要加大抗体比例,如果按说明书的最低推荐比例还是“白板”,那应该不是稀释比例的问题了;


③一抗孵育时间,常规的一抗孵育条件是4℃过夜,有时候抗体反应比较“迟钝”可能需要更强烈的孵育时间,比如延长孵育时间至2天,或者把摇床放入冰箱缓慢摇动孵育过夜,我们不建议37℃进行抗体孵育;


④ 显色体系的选择,一般来说ECL化学发光要比DAB灵敏5-10倍以上,所以尽量使用ECL;ECL发光液也分很多种,普通型、灵敏型、超灵敏型,我们都尝试过,的确在信号上有非常明显的差异;当然延长曝光时间也是提高信号灵敏度最常规的方法。

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dxy_xextz7w2

有帮助

可能是抗体不行了,或者发光液不行,可以尝试一下替换一下

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