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阴性对照组的目的条带kd位置没有出现条带,这样是否可以排除为抗体在该位置可能存在非特异性结合?同样目的条带kd位置不是常见轻重链位置,全膜ip轻重链清晰可见,可以排除轻重链干扰。
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这可能是由于以下原因:
1. 共价交联:共价交联是指两个或多个蛋白质之间形成的共价键。如果截短质粒上的区域包括两个或多个蛋白质之间的交联位点,则所有截短都可能与目的分子相互作用。
2. 不完全截短:如果截短质粒没有完全截短,也可能导致所有截短都能够拉到目的分子。这可能是由于截短质粒的设计存在问题,例如设计的引物不准确或控制序列没有完全删除。
3. 结构域与目的分子的接口:如果截短质粒上的结构域与目的分子的接口相互作用,则所有截短都可能与目的分子相互作用。这可能是由于结构域与目的分子的接口具有较高的亲和力。
为了确保实验的准确性,可以使用多个截短质粒进行实验,并使用其他实验方法进行验证,例如对蛋白质进行免疫共沉淀,Western blotting等。
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我也遇见过,而且我了解到其他人也遇到过。
我们的处理是:在加琼脂糖珠和抗体的时候,以及琼脂糖珠洗脱的各个步骤尽量细心一点,尽量保持每个样品加的试剂量一致,最后以拉到最少的那个截短质粒为准。
但是这样的结果存在假阳性,所以后面还需要做一些其他实验再次验证。
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