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科研学霸天团,48小时有问必答
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阻断ELISA
yaonan120
1.是不是阻断剂效果不好呢2.这种情况可以说是灵敏度的问题吧,标记那边是否可以降低标记量。3.降低空白,稀释液中加点BSA可以降低空白。希望可以帮到你
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WB为什么这么难做,一时有条带,一时没有
inventbiotech
WB其实也是一个很灵敏的蛋白检测技术。蛋白样品提取时产生的偏差会导致条带一时有一时无,尤其时目前大家常用RIPA来进行总蛋白的提取,当目标蛋白处于细胞核,细胞器,细胞膜上,这些蛋白在RIPA提取总蛋白时,细胞核因为裂解的不充分核不破或者是裂解特别大染色质打开样品粘稠核内一些蛋白依然不能释放,细胞器和细胞膜上的蛋白因为是膜蛋白脂质层包裹在RIPA裂解液中溶解度有限,尤其是跨膜蛋白这种问题就更为突出,
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WB曝光后发现无目标条带,但内参条带比较好的原因有哪些
inventbiotech
这种情况可以说明WB操作没问题,需要考虑目标蛋白一抗,目标蛋白如果是外源性表达,需要找一下表达条件,载体。内源性表达,就需要考虑蛋白提取的时候是不是提取出来了,尤其是表达在细胞核细胞器和细胞质膜上的蛋白。提取时如果是用RIPA提取的,很容易将这些部位的蛋白丢失在RIPA的不可溶性组分里。还有一种情况就是这个目标蛋白表达丰度特别低,需要针对于所在部位进行富集再行WB检测
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小鼠肺洗液怎么做Elisa,稀释方法和血清一样么
bamboopiggy
稀释方法是一样的,但是要做个预实验看看需不需要稀释
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求助大家做WB电泳液和电转液重复使用几次
inventbiotech
电泳液内槽每次都是新的,外槽2-3次,电转液重复用不好吧
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做WB的一抗二抗重复利用几次需要换
天一湖医者
做WB的一抗二抗重复利用2次就需要换。
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WB杂His标签的结果,为什么一大团糊糊的
天一湖医者
应该是你转膜的时候,膜和胶之间没有很好的贴合而导致的空泡。转膜时一定要把膜和胶良好贴合才可以,有一个诀窍是在转膜缓冲液中浸泡着贴合,虽然费点缓冲液,但几乎不会出现空泡现象了。如果你用半干转的话,建议你换成湿转法,也可以降低这个问题出现的概率。
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已知蛋白的互作蛋白的筛选
balalaLy
找下游的互作蛋白,过表达或敲低目的蛋白后收集细胞做质谱或组学。
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求小鼠肾脏组织NLRP3表达的WB条件
Eason老歌迷
这几个目的蛋白大小的条带,我都跑出来过。我的建议是你转膜时间还是要延长,可能是没转上。然后你跑大蛋白,你的胶可以配10%的跑
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ACE2蛋白做wb
秋秋欣欣
是你的蛋白有问题还是抗体的问题呢,蛋白测浓度检测一下吧
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竞争ELISA和阻断ELISA的区别是什么呢?
天一湖医者
竞争ELISA和阻断ELISA免疫抗体检测方法都可对小反刍兽疫病毒免疫抗体进行检测,在同一块96孔酶标板中,竞争ELISA和阻断ELISA可以分别检测43份、93份和90份样品,但是竞争ELISA的操作相对比较复杂,且用时较多;阻断ELISA的操作简单,用时少。如果同时检测100份样品,竞争ELISA和阻断ELISA的准确率分别为85%、88%和95%,因此阻断ELISA的准确度和重复性均高于其竞
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问
这个结果可能是因为哪些步骤出现了何种问题啊?
木笔X3T4
多冲几次一抗,或者延长洗的时间
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水化上样缓冲液II 和III在哪里用
天一湖医者
一般用于二维电泳和双向电泳实验。
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慢病毒液一定要浓缩吗?
是个疯子
要,通常需要浓缩病毒颗粒以获得高滴度,特别是需要感染大量细胞或者用于某些对转导具有抵抗力的细胞系时。
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慢病毒感染细胞时一定要用polybrene吗?
Eason老歌迷
Polybrene是带正电的小分子,它可以抵消病毒囊膜和细胞膜表面的阴离子,提高慢病毒对细胞的感染效率,通常加入polybrene能提高感染效率2~10倍。其实,非VSVG包膜的病毒不用polybrene,这个具体情况要具体分析。
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为什么我跑的胶,按照maker剪总会把条带剪丢?
whilt-shirt
有可能是胶的体系不均一导致marker指示不对
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原核表达蛋白会出现包涵体,蛋白难以复性,那用真核表达蛋白要如何操作?
天一湖医者
在真核细胞中表达蛋白的步骤比大肠杆菌复杂得多。首先要考虑选用什么载体。一般趋向于使用分泌表达载体,以便于蛋白的纯化。但有的蛋白并不适合于分泌表达,如一些胞质蛋白,非糖基化蛋白等。此外分泌表达的蛋白信号肽存在一个效率问题。有的蛋白即使存在信号肽,也不能分泌。并且有的分泌蛋白较易受到蛋白酶的降解。所有这些因素都需综合考虑。1、克隆 选用合适 的内切酶把外源基因克隆于表达载体的多克隆位点。如果选用的是分
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最近做信号通路,为啥上游的蛋白表达降低,下游蛋白表达升高?
balalaLy
上下游蛋白已知的调控关系是促进还是抑制?如果是抑制关系那就是正常,如果是促进,那你可能需要做一下不同的时间点,或者下游蛋白的活化状态。
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跑WB时,浓缩胶太长会导致条带连在一起或模糊一片吗?
秋秋欣欣
胶连成一片不是浓缩胶太长的原因,多半是因为样品里盐容量含量太高,被拉着往两边跑
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分子伴侣共表达的蛋白纯化
Eason老歌迷
通常机器用线性方法洗脱蛋白这样方法有的时候并不能得到好的纯化效果,可选择不同浓度的咪唑做阶段洗脱,此外可用盐酸胍代替尿素试一试。
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