求小鼠肾脏组织NLRP3表达的WB条件

你好，我们做凋亡相关课题，最近在跑NLRP3、GSDMD、Caspase-1等因子，我们NLRP3结果基本可以，以下是我们的步骤：
分离胶浓度12%（我们跑全膜，保留所有maker且一张膜脱膜再敷其它抗体）；

蛋白上药量依照BCA测量结果；

一抗使用索莱宝 浓度1：2000，二抗抗兔 1：5000

电泳85V 80min 105V20min 电转 200mA恒流120min

封闭：脱脂奶粉：TBST=1g：10ml 4h以上

一抗4℃ 10h 二抗 室温 55min

一抗、二抗后洗膜：TBST 7min/次3次

希望有帮助

NLRP3好像是比较难跑，分子量在100以上，你这个转膜条件不够，可以用8%或10%的分离胶，转膜250mA 150-180min.然后国产抗体用1：1000是不是要提高一下浓度。

caspase-1分子量比较小可以用12%的胶，都是不容跑的蛋白，加油吧。

考虑抗体问题，或者试试恒流300mA转膜1.5h试试

这几个目的蛋白大小的条带，我都跑出来过。我的建议是你转膜时间还是要延长，可能是没转上。然后你跑大蛋白，你的胶可以配10%的跑