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科研学霸天团,48小时有问必答
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求FOXO3a过表达质粒
Eason老歌迷
具体可以参看这篇文章,我觉得它讲的很清楚。这是一篇2014年发表在生物技术通讯上的文章。
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酵母蛋白诱导问题
Eason老歌迷
我们都是通过实验或者结合文献来探索出最佳区间。温度常温或者28℃。ph6.0—6.8等等。
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核酸电泳环状PCR产物两条带
Miracle星
应该是片段降解了或者这个估计是引物带,PCR反应的时,退火温度,引物系列等都会造成引物带,还有可能是非特异性产物
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重组阴性对照长了很多菌?
Miracle星
重新再做一次,会不会是环境因素:做过三个地点的排查,一是常做实验的实验室,二是通风好的地方,三是超净台
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LAMP扩增假阳性问题
Eason老歌迷
LAMP 扩增技术灵敏度高,一旦开盖就容易形成气溶胶污染,目前国内大多数实验室不能严格分区,假阳性问题比较严重。大量研究推荐使用浊度计等不开盖方法检测扩增产物。
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问
qpcr如果目的没有差异,会是引物的问题吗?
Eason老歌迷
才半个多月,不可能会失活的,除非你们实验室停电了…… PCR引物要在-20℃或-70℃保存,要避免反复冻融造成DNA降解。我觉得你跑不出差异,可能是差异不是特别明显
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DNA合成中BrdU的掺入
Eason老歌迷
可以的,它也是属于原料的一种,
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问
CRISPR CAS9质粒 T7E1 sanger sequencing TAcloning
bamboopiggy
你可以直接梯度稀释,铺96孔板,挑单克隆。然后得到目的细胞。 只要有knock out T7E1 就能切出条带。你这么混着,送测序,绝对是套峰
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在第2向电泳中,为什么我的溴酚蓝条带都跑到玻璃板下缘了,而蛋白质只跑了一半啊?
Bnight
1、电泳缓冲液的问题:换用新鲜的电泳缓冲液2、分离胶内浓度不均:灌胶的时候胶要混匀3、分离胶凝固不均一:如玻板没洗净,玻板在灌胶前用吹风吹干时没冷却就灌胶
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抗体纯化求助
红格子一号
你首先要确定纯化之后是不是有蛋白质,看丽春红或者sds page,没有条带也有可能是纯化出问题了呀
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求助!有人知道这种能分离单个碱基的电泳是怎么跑的吗
yanlai000
RFLP把,限制性内切酶片段长度多态性
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求助/fluo-8am染料会淬灭吗?
Eason老歌迷
会。光照射是致荧光淬灭的最常见原因,光照射也会促进激发态分子与其他分子相互作用而引起碰撞,使荧光淬灭。溶剂种类、pH值及温度等环境条件的不同也会让淬灭发生。
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求助 | 给药之后p-Akt变化不明显,t-Akt表达减少明显
Eason老歌迷
我也遇到过,实际实验和预想实验结果不同,甚至相反,建议你多做几个重复,看看是不是偶然事件。
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16S rRNA测序数据处理
Eason老歌迷
它这个软件要linux系统啊,你用miniconda、anaconda这种软件商城下载它的安装包。建议使用miniconda,因为它更简单。下载完你在win系统里运行linux即可。
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一直长不出噬斑,有无懂行大佬了解此类情况
Eason老歌迷
所用细菌是否正确?也就是是否是lamda噬菌体的宿主菌。NZY top是否够好?温度太高?浓度也就是营养不行?PH对么?培养时间是否足够长?培养温度是否合适?噬菌体活力是否够,也就是文库保存不当的话,噬菌体已经没活力了。测测,增大噬菌体的量再培养看看。培养的时候,适当将噬菌体和宿主菌先放37°孵育半小时,也许会好一点,增加粘附,侵入。
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双荧光素酶测定目的基因的突变体不受某个调控基因的影响
Eason老歌迷
我觉得还是用cmv启动子比较好。
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加甲酰胺的作用是什么,只加尿素变性可以吗?
Eason老歌迷
尿素和甲酰胺,它们可与碱基间形成氢键。
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race实验中特异性引物如何设计?有没有什么判断标准?
Miracle星
引物设计 使用锁定引物(lock docking primer):在oligo(dT)引物的3′端引入两个简并的核苷酸MN(结构为5′-oligo(dT)16-30MN-3′,M=A/G/C;N=A/T/C/G)。使用锁定引物可使引物定位在poly(A)起始位点,消除了在合成第一条cDNA链时oligo(dT)与poly(A)尾的任何部位结合所带来的影响。3′RACE以3′末端的poly(A)序列
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3’5’race具体操作步骤与原理
Miracle星
3′RACERACE的实验样本包括总RNA,poly(A)+RNA等。首先根据mRNA3′末端天然存在的Poly(A)尾部设计反转录引物逆转录获得第一条cDNA链。根据已知的cDNA序列设计基因特异性引物(gene specific primer,GSP)合成第二条cDNA链。随后以基因特异性引物(GSP)及正义链3′末端引物作为一对引物,对得到的cDNA链进行PCR扩增,从而得到cDNA的3′端
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核酸阳性质控VIC通道基因不起,内参和FAM通道基因表达的原因
哈哈好久
最好重新做一次,找能确定起的阳性再来一次,不然光一次无法确定是你操作还是什么原因
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