双荧光素酶测定目的基因的突变体不受某个调控基因的影响

如题 补充 已知甲基转移酶METTL3对H19调控 过表达和敲降L3会是H19的表达上调和下调 H19上有m6A位点 METTL3通过识别这个位点写入m6A来改变H19的表达 所以我想验证这个

我构建了H19的突变体和野生型 上面突变了几个m6A位点 然后我把突变体弄到PGL3上连同启动子一起 然后转染到已经过表达和敲降的L3的细胞上 测荧光素酶活性 预期结果是突变体的荧光素酶活性不受L3敲低和过表达影响 而突变体受影响

现在的问题是启动子用什么启动子 用细胞体内H19本生的启动子还是CMV通用启动子 如果用CMV通用启动子那么会不会不受L3的调控 因为CMV这个启动子表达很高效 还有细胞有本底H19的表达 转进去的载体会不会受L3的影响 求大神解答🙏🙏🙏