非同位素分析报道基因活性实验

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

报告基因是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，也就是说，是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融合，在调控序列控制下进行表达，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控，筛选得到转化体。

来源：丁香实验

操作方法

萤火虫荧光素酶法

1. 用冰冷的PBS洗涤在3个60 mm 培养皿中的转染了荧光素酶表达质粒的细胞各3次，毎次用4 ml PBS洗后吸去洗液。 2. 每个培养皿中加入350 μl Triton/甘氨酰甘氨酸裂解液。用橡皮刮子刮下细胞，将溶解的细胞转入1.5 ml 微量离心管中。4℃以最大速度微量离心5 min。将上清（细胞裂解液）转入一个干净的微量离心管中，置于冰上以备分析。 3. 在旋涡混合

冻融裂解的细胞的荧光素酶分析

1. 用PBS分别洗3个60 mm 培养皿中的转染了荧光素酶质粒的细胞。 2. 每只培养皿中加1 ml 提取缓冲液，立即用橡胶刮子刮下细抱，移至1.5 ml 微量离心管中。离心15~30 s，弃上清。 3. 在细胞沉淀中加100 μl 提取缓冲液，经3次冻融裂解细胞膜。 4. 将裂解的细胞在4℃以最大速度离心5 min，移出上清，分析其荧光素酶的活性。

β-半乳糖苷酶报道基因的化学发光分析

1. 用PBS分别洗涤两次60 mm 培养皿中的转染β-半乳糖苷酶表达质粒的细胞及模拟转染的细胞。 2. 加入250 μl Triton裂解液，用一橡胶细胞刮子将细胞刮下来。将细胞提取物转移至1 个1.5 ml 微量离心管中。在4℃以最大速度离心2 min，将上清转移至一个干净的微量离心管中。 3. 在一只发光计的测试管中加2~20 μl 细胞提取液。再加200 μl β-