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科研学霸天团，48小时有问必答
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菌液pcr
毛利小五郎的徒弟
如果只有一个位点还有目的条带的话可能是有非特异性结合
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问
问下各位老师同学，为什么我跑出来的电泳条带会这样
balalaLy
有几个问题：1、你的内槽running buffer应该是漏的，这个是导致电流不均衡，体现在你的sample条带像山坡一样，不在一个水平线上。2、你使用的loading buffer不行，不能将sample压缩成比较小的体积，或者你试一下加入10分之一的巯基乙醇试试。又或者你是不是用错了DNA的loadingbuffer。3、加10ul marker唯一的好处是能证明你们课题组经费比较宽裕，mar
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问
电镜看心肌组织的焦亡
精准检验每一天
透射的要好用很多，多找几个面应该能找到！
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问
EMSA未加蛋白的孔出现条带
毛利小五郎的徒弟
考虑是上样量太少，增加上样量，延长孵育时间。
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问
单B细胞分选
毛利小五郎的徒弟
加大样本量，更换筛选孔径，多用pbs清洗。
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问
蛋白组labefree缺失值如何处理？
Amor良
如一个蛋白中三个重复，2个有值，建议保留，1个有值，严格一点考虑过滤掉。
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问
求助FC标签蛋白如何切除
毛利小五郎的徒弟
如果二者不是重叠序列的话可以不切除，互相不影响
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问
提取肌腱蛋白
毛利小五郎的徒弟
机器研磨就可以，结缔组织要加蛋白酶和裂解剂，可以研磨好一些。
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问
重组质粒单酶切后转入酵母菌X33，菌落长出来了很多的但是做菌落PCR却都不对，为什么
毛利小五郎的徒弟
考虑是有杂菌污染，优势菌繁殖不明显。
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有人养过金葡菌usa4300吗
huarenqiang5
usa300里面一般都自带质粒，但你这都不知道保存的具体情况，做实验估计结果有影响。
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问
萤火虫荧光素酶的酶活检测
huarenqiang5
荧光素酶活性与细胞状态、转染条件、转染量、载体结构、启动子活性等有关。可以从这些方面查找一下原因。
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问
UGT1A1测序方法有哪些？
huarenqiang5
主要有：1、芯片法。 2、UGT1A1的基因型特异性荧光引物、缓冲液以及Taq酶等成分组成，采用PCR体外扩增的方法，在一条PCR引物的5’端标记荧光染料，在PCR扩增时，PCR产物带上荧光标记，然后采用高分辨率胶电泳对扩增片段进行分离，通过荧光检测系统确定扩增片段的长度，来实现对人类基因组DNA的UGT1A1基因TA6/6、TA6/7、TA7/7基因型进行定性检测。
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问
求助| 带GFP荧光的细胞该怎么选ROS试剂盒？
huarenqiang5
用Amplite ROS荧光法检测试剂盒试试
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琼脂糖凝胶电泳
超级无敌小旋风
凝胶配置不均匀，重新配胶试试！
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问
RNA琼脂糖凝胶电泳
大草原的小灰驴
可能提取过程中使用的纯水或者试剂被RNA酶污染，导致样品RNA被降解。还要看一下跑胶的条件是否需要调整，比如电压，缓冲液等。
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问
求一份跑核酸变性Page的配方
c_Yeats
溶液配制（1）10×甲醛变性胶缓冲液配制（2000ml） NaAc.3H2O 13.6g，MOPS 83.6g，EDTA二水二钠 7.44g； 加DEPC蒸馏水1600ml，转子溶解至透明澄清； 调节PH至7.0, 容量瓶定容至2000ml，混匀至澄清透明。4℃放置备用。（2）10×甲醛变性胶loading buffer配制（RNA专用） 16 ul gelred +
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问
log2FoldChange大于多少合适？
dxy_xm5w7hg4
绝对值大于1.5就可以，相当于可信区间增大。
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问
怎样才能使琼脂糖凝胶电泳条带更清晰？
huarenqiang5
1.上样量适中，不要太多也不要太少，太多容易拖尾，太少跑出来条带不清晰。2.电压调低一些，跑的慢一些时间长一些。3.配胶琼脂糖浓度要适宜，目的基因较大浓度低一些，目的基因较小浓度高一些。4.选择合适的tae溶液。5.加样时要悬空，不要戳到胶孔边缘。
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问
质粒为模板，进行胶回收，没有带
申东熙老伯
重新配胶跑一次看看，可能上样的时候没吸到质粒。
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问
#拟南芥基因CDS序列#
huarenqiang5
借鉴一下这篇文章《基因家族分析-提取某个结构域的序列，对应的蛋白质序列和cds序列（1）》，很详细。
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