求一份跑核酸变性Page的配方

溶液配制

（1）10×甲醛变性胶缓冲液配制（2000ml）

NaAc.3H2O 13.6g，MOPS 83.6g，EDTA二水二钠 7.44g；

加DEPC蒸馏水1600ml，转子溶解至透明澄清；

调节PH至7.0, 容量瓶定容至2000ml，混匀至澄清透明。4℃放置备用。

（2）10×甲醛变性胶loading buffer配制（RNA专用）

16 ul gelred + 4.984 ml DEPC水 +10ml 6×核酸loading buffer

电泳

动物标本用1.3%凝胶，植物标本用1.4%标本。

（1） 配制1.3%甲醛变性胶

将10×甲醛变性胶缓冲液用DEPC水配制为 1×甲醛变性胶缓冲液3g/100ml缓冲液，微波炉融化。因为溶液会挥发，一般多方2-4ml缓冲液。

注意：融化中观察颗粒，不要长时间加热，在首次沸腾后，每10s取出摇动，直至澄清完全没有颗粒物或丝状悬浊物。冷却至5-060℃倒入模具，加梳子室温静置30min。

（2） 拔取梳子时候不要直接拔，用缓冲液湿润凝胶表面，干燥会造成梳子周围胶裂开。

将4℃冷却的缓冲液倒入电泳槽，如果是二次使用，电泳槽放入冰盒中。

按照RNA浓度，取0.3微克RNA和2.5微升配置好的loading buffer（如果浓度较高，体积小于3微升，需要加入3ul水平衡体积，不管梳子大小，保证胶孔底部加满，确保条带完成。）。混合好的样本放入金属浴或PCR仪在65℃下变性5min。

（3） 点样，marker为trizol制备的HEK293T或者Hela细胞的RNA，这两种细胞比较大，提出的RNA浓度和纯度合适。

（4） 120V电泳10-15min，随时观察，电泳位置约为电泳槽一般到2/3，标准的样本会出现三条带，分别为28S，18S，5S。28S和18S的亮度比为2:1为最好。1：1也可以用。从大到小亮度比例变化为RNA降解造成。

跑核酸变性Page的配方可参考下表