蛋白质实验

滴定曲线是呈现样品中每个组分的迁移率对 pH 的曲线，为此先将含有载体两性电解质的凝胶进行等电聚焦。然后转 90°，加样，并使样品在垂直于 pH 梯度方向进行常规电泳。本实验来源「蛋白质电泳实验技术」主编：郭尧君。

双向电泳可应用于蛋白质组学研究。

血清蛋白质聚丙烯酰胺凝胶具有机械强度好、弹性大、透明、化学稳定性高、无电渗作用、设备简单、用样量少和分辨率高等优点，并可通过控制单体浓度或单体与交联剂的比例聚合成孔径大小不同的凝胶，用于蛋白质、核酸等物质的分离、定性和定量分析。 根据凝胶形状不同分为盘状电泳和板状电泳。盘状电泳是在直立的玻璃管中，利用不连续的缓冲液pH值进行电泳而命名，同时，样品混合物分开形成的带很窄，呈圆盘状，因此圆盘电泳这个

血清脂蛋白经苏丹黑B染色后，以琼脂糖为载体，在pH8.6巴比妥缓冲液中进行电泳，可将脂蛋白分成不同的区带。按电泳移动的速度不同，正常人血清脂蛋白可出现三条区带，从阴极到阳极依次为β-脂蛋白（最深）、前β-脂蛋白（最浅）、α-脂蛋白（比前β-脂蛋白略深些）。在原点处应无乳糜微粒，也见不到中间脂蛋白的条带，有时前β-脂蛋白也显示不出来。

由于蛋白分子中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，因此蛋白质具有吸收紫外线的性质，吸收高峰在280nm波长处。在此波长范围内，蛋白质溶液的光吸收值（A280）与其含量呈正比关系，可用作定量测定。 由于核酸在280波长处也有光吸收，对蛋白质的测定有干扰作用，但核酸的最大吸收峰在260nm处，如同时测定260nm的光吸收，通过计算可能消除其对蛋白质测定的影响，因此溶液中存在核酸时必须同时测定280

内容来源：广东药学院实验指导手册。

免疫标记技术是用特定的物质标记抗原或抗体进行的抗原抗体反应。可借助各种仪器观察结果或进行自动化测定，可在细胞、亚细胞、超微结构及分子水平上，对抗原抗体反应进行定性和定位研究；或应用各种液相和固相免疫分析方法，对液体中的抗原、半抗原或抗体进行定性和定量测定。

在大多数情况下，免疫血清、杂交瘤细胞培养上清以及腹水中的抗体需经纯化后再用于各种免疫学检测中去。免疫球蛋白常用的纯化方法有盐析法、凝胶过滤、离子交换层析、亲和层析以及高效液相色谱等方法。（来源：医学基础免疫学实验指导，主编金伯泉李恩善，第1 版，北京：世界图书出版社，1990）

本实验是以蔗糖为底物, 利用一定浓度的蔗糖酶水解不同浓度的蔗糖所形成的产物( 葡萄糖和果糖) 的量来计算蔗糖酶的Km值。

蔗糖酶( inver tase ) (β-D-呋喃果糖苷果糖水解酶) ( fructofuranoside fructohydrolase ) ( EC. 3 . 2 . 1 . 26 ) 特异地催化非还原糖中的α-呋喃果糖苷键水解, 具有相对专一性。不仅能催化蔗糖水解生成葡萄糖和果糖, 也能催化棉子糖水解, 生成密二糖和果糖。本实验旨在提取啤酒酵母中的蔗糖酶。

本实验以酵母RNA 为材料, 将RNA 用碱水解成单核苷酸,再用离子交换柱层析进行分离, 最后采用紫外吸收法进行鉴定。旨在了解并掌握RNA 碱水解的原理和方法，掌握离子交换柱层析的分离原理和方法，熟练掌握紫外吸收分析方法。

本实验旨在了解和掌握紫外分光光度法、定磷法、定糖法测定核酸的基本原理和操作方法。共描述了3种方法。

蛋白质的α-氨基与丹磺酰氯(DNS-Cl 是一种荧光物质) 反应, 生成DNS-蛋白质, 经水解可生成DNS-氨基酸。本实验旨在了解丹磺酰化法分析蛋白质N-末端氨基酸的基本原理以及掌握蛋白质的水解和聚酰胺薄膜层析的操作方法。

混合蛋白质样品中各种蛋白质的等电点不同, 在pH8 . 6 的巴比妥缓冲液中, 各种蛋白质所带的静电荷量不同, 加上蛋白质分子大小不相同, 在电场中移动的速度也不等, 例如, 血清或卵清样品中白蛋白等电点比其他蛋白质低, 在pH8 . 6 时带的负电荷比其他蛋白质多, 加上白蛋白的分子较小, 因此在电场中比其他蛋白质移动速度快。这样, 样品中的蛋白质在醋酸纤维素膜上就可以形成区带, 可以分离和分析

凝胶过滤也称排阻层析、分子筛层析和凝胶层析。本实验目的是了解凝胶过滤层析法测定蛋白质分子量的基本原理，巩固柱层析的操作方法。

本实验的目的是了解盐析分级分离蛋白质的基本原理及操作；了解葡聚糖凝胶SephadexG-25脱盐的基本原理和凝胶柱的制备及洗脱技术以及了解752型紫外可见分光光度计的使用方法。

很多膜可作为蛋白质电转移的固相支持物，如重氮化纤维素膜（DPT， DBM）、DEAE-纤维素膜、尼龙膜等，但用的最多的还是硝酸纤维素膜（NC膜），该膜与蛋白质以非共价的疏水作用形式结合，结合能力约为80 μg/cm2。

鉴定蛋白质中磷酸化的氨基酸残基是很有意义的。磷酸化作用发生在蛋白质的丝氨酸、苏氨酸和酩氨酸时，通过部分的HCl水解及接着进行双向薄层电泳，可以便利地鉴定 标记的磷酸氨基酸。

鉴定蛋白质中磷酸化的氨基酸残基是很有意义的。磷酸化作用发生在蛋白质的丝氨酸、苏氨酸和酩氨酸时，通过部分的HCl水解及接着进行双向薄层电泳，可以便利地鉴定 标记的磷酸氨基酸。

蛋白质（protein）是生命的物质基础，没有蛋白质就没有生命。因此，它是与生命及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质。