免疫球蛋白标记技术

蛋白质实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

免疫标记技术是用特定的物质标记抗原或抗体进行的抗原抗体反应。可借助各种仪器观察结果或进行自动化测定，可在细胞、亚细胞、超微结构及分子水平上，对抗原抗体反应进行定性和定位研究；或应用各种液相和固相免疫分析方法，对液体中的抗原、半抗原或抗体进行定性和定量测定。

来源：丁香实验

操作方法

酶标记抗体

一、酶制剂及其底物凡无毒性又能呈现有色化学反应的酶，原则上均可作为标记用。但作为标记抗体用的酶应满足下列要求 1. 来源方便，易于纯化； 2. 比活性高，性质稳定； 3. 酶活性和量能用简单方法测定。目前在免疫酶技术中常用的酶为辣根过氧化物酶（HRP）和硷性磷酸酶（AP），其次还有葡萄糖氧化酶，β-半乳糖苷酶、溶菌酶和苹果酸脱氢酶等。　　由于辣根过氧化

荧光素标记抗体技术

1. 将纯化的IgG抗体对PH9～9.5碳酸盐缓冲液透析过夜，透析后抗体液移入小烧杯中　　　　　　　　　　　　　　　　　　 2. 称取适量IFTC，加入二甲亚砜（DMSO）（FITC～1 mg/1 ml DMSO），使终浓度为1 mgFITC/1 mlDMSO 　　　　 FITC/IgG比例如IgG浓度为1 mg/ml，FITC/IgG比例约为50 μgFITC/mgIgG

125I标记单克隆抗体技术

1. 在细胞冻存管内加入纯化的McAb100 μg/100 μl，再加入10 μl 0.05 M磷酸缓冲液，再加入10 μl（含1 mCi）125I 　　　　　　　　　　 2. 加入10 μl氯胺-T（5 mg/ml溶于0.05 M磷酸盐缓冲液），孵育时间不超过30秒　　　　　　　　　　　　　 3. 加入100 μl偏重亚硫酸钠（1.2 mg/ml溶于0.05 M磷酸缓冲液）