原理
氯胺桾即对甲苯碘氯胺钠，在水溶液中生成次氯酸，为一种温和氧化剂，当加入到有蛋白质和碘的弱碱水溶液中，可将I2氧化为I＋并结合到氨基酸上。如标记条件温和，标记后的McAb仍具有良好的结合活性，通过放射性同位素强度的测定可反映相应抗原的含量。
材料与仪器
McAb 125I
磷酸缓冲液 氯胺桾 偏重亚硫酸钠 KI BSA
超净台 γ计数仪 PD10柱
磷酸缓冲液 氯胺桾 偏重亚硫酸钠 KI BSA
超净台 γ计数仪 PD10柱
步骤
1. 在细胞冻存管内加入纯化的McAb100 μg/100 μl，再加入10 μl 0.05 M磷酸缓冲液，再加入10 μl（含1 mCi）125I
5. 用PD10柱（Sephadex G25）除去游离125I。用4 ％BSA、PBS洗脱
结合于某一管McAb上的放射性强度
2. 加入10 μl氯胺-T（5 mg/ml溶于0.05 M磷酸盐缓冲液），孵育时间不超过30秒
3. 加入100 μl偏重亚硫酸钠（1.2 mg/ml溶于0.05 M磷酸缓冲液）
4. 加入200 μlKI溶液（少许结晶KI溶于0.05 M磷酸缓冲液＋4 ％牛血清白蛋白）
5. 用PD10柱（Sephadex G25）除去游离125I。用4 ％BSA、PBS洗脱
6. 分部收集，0.5 ml/管。每管取5 μl进行γ计数，计算标记抗体的比活性和标记率
结合于McAb125I放射性强度（cpm）
标记率（％）＝───────────────────
总放射性强度（cpm）
结合于某一管McAb上的放射性强度
比活性（μCi/μgMcAb）＝────────────────
某一管McAb总量
注意事项
1. 严防同位素污染，工作人员必须穿着工作衣，戴口罩、帽子、手套。必须在严密的通风橱或通风超净台中操作。操作前后对实验室环境进行监测。所用125I和标记物应妥善保管。
2. 如标记细胞因子、激素等，应选用更温和的标记方法，使保持更好的生物学活性。
2. 如标记细胞因子、激素等，应选用更温和的标记方法，使保持更好的生物学活性。
来源：丁香实验
