丹磺酰化法分析蛋白质 N-末端氨基酸实验

实验分类：

蛋白质实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

蛋白质的α-氨基与丹磺酰氯(DNS-Cl 是一种荧光物质) 反应, 生成DNS-蛋白质, 经水解可生成DNS-氨基酸。本实验旨在了解丹磺酰化法分析蛋白质N-末端氨基酸的基本原理以及掌握蛋白质的水解和聚酰胺薄膜层析的操作方法。

来源：丁香实验

操作方法

丹磺酰化法

1. 标准氨基酸的丹磺酰化分别称取2 . 3μmol 层析纯的氨基酸, 溶于0 . 5 ml 0 . 2 mol/ L碳酸氢钠溶液中。取0 . 1 ml 于有塞玻璃试管中, 加入0.1 mlDNS-Cl 丙酮溶液, 检查pH, 必要时用三乙胺调pH9 . 0～ 9 . 5 ,于室温(25 ℃ 左右) 下放置2～ 4 h。再用无离子水稀释10 倍,贮存于暗处。经层析, 得DNS-氨基酸