重组蛋白质的大规模生产实验

实验分类：

蛋白质实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

蛋白质（protein）是生命的物质基础，没有蛋白质就没有生命。因此，它是与生命及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质。

来源：丁香实验

操作方法

基本方案

1. 在悬浮培养液中培养Sf9细胞，并使之适应无血清培养液。 2. 准备旋转培养瓶，用于按比例扩增Sf9细胞，将合适大小的两孔盖连接在转瓶的一个侧臂，另用一平盖接在另一侧臂。将一段短管（约6英寸或15 cm）装在通气孔中，末端连接一滤器，借助张力器用管索将管子与通气孔和滤器固牢。 3. 将一段长管（30~60 cm）连接至进气孔，并在末端连接一滤器，用管索加固，另一段管子连接

碱处理法

1. 用SDS-聚丙烯酰胺凝胶制备电泳分离放射性标记的瞵酸化蛋白质，电转移至PVDF膜上。 2. 用水充分洗膜，用1 000 ml 水洗3次，每次2 min。 3. 塑料容器内，用足够的1 mol/l KOH浸过膜，在55℃烤箱或水浴锅內温育120 min。 4. 倒尽KOH，膜用500 ml TN缓冲液浸泡5 min 以中和残余的KOH，用500 ml 1 mol