蛋白质修饰

蛋白质磷酸化属于蛋白质翻译后修饰，是细胞信号转导过程中常见的一种修饰方式，常常用来调节蛋白的活性、构象和相互作用等生物学功能。真核生物中常见的磷酸化发生于丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸和组氨酸残基上。研究蛋白的磷酸化状态对于理解细胞生物学过程具有重要意义。检测蛋白质磷酸化水平的方法有蛋白质免疫印迹（Western blotting）ELISA 酶联免疫反应、细胞免疫化学（ICC）、流式细胞术和磷酸化抗体芯

棕榈酰化修饰是一种重要的蛋白质修饰方式，指的是将棕榈酸酰化于蛋白质分子的赖氨酸残基上。这种修饰方式在细胞信号传导、膜定位和蛋白质相互作用等生物学过程中发挥着重要的作用。质谱分析是一种常用的棕榈酰化修饰检测方法，它可以通过测量蛋白质分子的质荷比（m/z）来确定蛋白质分子中是否存在棕榈酰化修饰。

蛋白质棕榈酰化修饰是一种可逆的翻译后脂质修饰，通常被认为可以调节蛋白质的亚细胞定位。

作为重要的调节细胞生物学进程的生物分子修饰方式，棕榈酰化修饰是一种常见的蛋白质修饰方式，通过增加一分子酰基使蛋白质转化为膜蛋白或膜相关蛋白，它可以影响蛋白质的稳定性、激活性、定位和相互作用等生物学功能。目前荧光共振能量转移（FRET）技术是一种常用的检测蛋白质间相互作用的方法，也可以用于检测蛋白质的棕榈酰化修饰。

材料与设备 纯化的胰岛素受体，得自胰岛素-琼脂糖柱层析（见本单元实验 4） 内切糖苷酶 F(N-聚糖酶；Boehringer Mannheim Corp.903329 或 Genzyme Corp.) 内切糖苦酶 H(Boehringer Mannheim Corp.100117 或 Genzyme Corp.ENDO HI) 神经氨酸酶（Boehringer Mannheim Corp.

鉴定糖基化及寡糖链结构的另一种方法是在糖基化反应过程中使用抑制剂。 有的抑制剂作用在糖基化的早期阶段，如衣霉素（tunicamycin）， 可阻止所有 N－ 连接寡糖链的形成。

寡聚化指单体化合物之间形成二、三、四聚体或长链分子（低聚物）。在生物背景下，寡聚化通常是指生物大分子（如蛋白质）通过非共价相互作用形成大分子复合物的过程。在生理或病理状态下，生物体内都会有寡聚化的现象。

在 T4 多核苷酸激酶的正向反应中，带有平端、5' 凹端或分子内切口的 DNA 底物比 5' 突出端的分子标记效率低。

一、样品还原 1.利用冷冻干燥离心机蒸发纯化的蛋白质样品溶液（含 0.01%~0.02% Tween-20)，直到少于 10ul。 2.加入 150ul 储存液到含有近乎干燥的蛋白质样品的离心管中，轻轻弹击或振荡离心管，使样品彻底混匀，然后略微离心样品。 3.加人 16ul 还原缓冲液，使 DTT 的终浓度为 15 mmol/L。 4.样品在 40°C 孵

去除 5' 端的磷酸基可防止质粒 DNA 的自身连接和环化。在体外连接反应中，DNA 连接酶可在邻近的两个分子间形成磷酸二酯键。但只有当一个分子的 5' 端带有磷酸基另一分子的 3' 端带有羟基时，这一反应才能完成。

磷酸化修饰是蛋白翻译后修饰方式之一，多发生在蛋白多肽链的苏氨酸、丝氨酸和酪氨酸的羟基上，影响着蛋白活性状态，参与了机体多种生理病理过程，蛋白质磷酸化位点的鉴定和分析已成为蛋白组学研究的重要组成部分。

乙酰化修饰是蛋白翻译后修饰方式之一，主要分为两类：蛋白赖氨酸上的乙酰化修饰和蛋白 N 端的乙酰化修饰，通常是在乙酰基转移酶的催化下，蛋白在转录过程中或转录后发生的修饰，参与了基因表达调控、细胞代谢、蛋白质稳定等机体多种生理病理过程，蛋白质乙酰化位点的鉴定和分析已成为蛋白组学研究的重要组成部分。

糖基化修饰是蛋白翻译后修饰方式之一，糖基化是在糖基转移酶作用下将糖基转移至蛋白质与蛋白质上氨基酸残基形成糖苷键，并在糖苷酶的加工下形成多种糖链的过程。糖基化可以发生在丝氨酸或苏氨酸侧链羟基上，也可以发生在天冬酰胺侧链氨基上，而每一个修饰位点的糖链可能存在不同的类型，其中包含 O - 连接糖基化和 N - 连接糖基化（高甘露唐型、杂合型和复杂型）修饰。糖蛋白在细胞信号转导、免疫应答、癌症等许多重要的

泛素化修饰是蛋白翻译后修饰方式之一，小分子泛素在一系列酶级联反应包括泛素激活酶、泛素结合酶、泛素连接酶作用下通过共价连接在底物蛋白或目的蛋白上，蛋白底物可以发生单一泛素化、多单泛素化、多泛素化（同型多聚泛素化、异型多聚泛素化），多聚泛素化发生在泛素分子的 7 个赖氨酸残基( Lys6, Lys11, Lys27, Lys29, Lys33, Lys48, and Lys63 ) ,或者 Met1

甲基化修饰是蛋白翻译后修饰方式之一，多发生在蛋白多肽链的精氨酸、赖氨酸、天门冬氨酸、天门冬酰氨、谷酰胺、谷氨酸、组氨酸和半胱氨酸上，或者蛋白质的 N 末端或 C 末端，研究最多的甲基化类型发生在蛋白多肽链的赖氨酸和精氨酸上，参与调控多种生物学过程，与衰老、癌症、老年痴呆等许多疾病息息相关。蛋白质甲基化位点的鉴定和分析已成为蛋白组学研究的重要组成部分。