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蛋白质修饰

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问化学交联法做蛋白质寡聚化的实验有人做过吗？求指导

你好几和户

一般可以分为In vivo 和in vitro两种情况。in vivo：用Cross－linker（such as DTSSP)处理细胞一定时间，如果你的蛋白是寡聚体形式存在，它可以把你的四聚体交联在一起，那么用不含DTT的裂解液收集细胞，然后跑胶，western，你可以看到在分子量4倍的地方有条带，设好各种对照，你可以判断出那是不是你的四聚体形式。

4 回答1337 围观

问请问除了使用质谱和核磁共振法，怎么确定一个蛋白质被糖基化修饰了？

汤姆卜丽波

糖基化位点的确定方法还可以用① PNGase F酶法；②Endo H酶法；③三氟甲基磺酸(trifluoromethananesulphonic acid，TFMS)法。

2 回答427 围观

问蛋白质翻译后修饰发生的亚细胞定位是否可通过修饰位点预测。

huarenqiang5

Sionalp 可以对革兰氏阳性菌，董兰氏阴性菊和直核生物的蛋白质序列进行信号肽分析。预测采用了隐马尔可夫和人工神经网络技术的融合。其训练数据是从 SwisProt 第 29 版中挑选来的，分为真核生物，革兰氏阳性菌，革兰氏阴性菌三组。除了 SignalP 可以对蛋白质序列进行信号肽分析外，还有诸如 Phobius、Philius、Spoctopus、Si

4 回答438 围观

问K48、K63泛素蛋白质粒表达出来的泛素有何不同？

lzy必有我师

K48就是一般设计目标蛋白的降解，连接仍然是细胞通过蛋白水解降解维持体内平衡的关键途径最远端的泛素第48位赖氨酸被精氨酸取代，限制链长。 K63连接的多泛素化修饰蛋白质已经涉及DNA损伤反应的调节，内体分选，蛋白质错误折叠/聚集的自噬等细胞过程和神经退行性病变。这些四泛素链是由野生型泛素的酶促连接产生的。最远端的泛素含有精氨酸取代赖氨酸第63位，限制链长K63一般涉及翻译后修饰的功能获得或者失活。

15 回答18633 围观

问想请问一下大家，检测磷酸化蛋白表达量变化的WB实验，除了加磷酸酶抑制剂之外，怎么操作可以让磷酸化蛋白更好跑出来呢？

Kimser

因为磷酸化是个可逆过程，所以除了磷酸酶抑制剂，还需要跟时间赛跑，新鲜和短时间流畅的操作会减少磷酸化的变化。当然，抑制剂仍然是关键所在，不过要注意对不同蛋白，磷酸酶抑制剂也不同。

3 回答930 围观

问磷酸化的抗体为什么总是杂不好

bamboopiggy

我牛奶和bsa都用过，这个其实是要看你的抗体好不好用，如果抗体好用，怎么杂怎么出。如果抗体不好用，一般都杂不好。此外，可以考虑在收样的lysis里面加点磷酸酶抑制剂。实在杂的难看，就换家公司买抗体，磷酸化的抗体，一般cst的还是不错的。

4 回答343 围观

问如何比较不同实验组蛋白的岩藻糖基化水平

dxyhsx123

可以做质谱啊，这个是目前比较多的，经费充足，质谱带你起飞。

23 回答1280 围观

问测糖基化修饰水平出现两个条带的原因

医往情深丁香园

最好再重复一次实验看看，另外，别人做糖基化跑全膜，主要也是想说明多个糖基化的位点，所以可能出现条带的位置改变，在整张膜上，都可能出条带。

18 回答2120 围观

问体外泛素化实验杂不到泛素修饰条带怎么回事呢

西柚味的芋圆

这个可能有多种因素的原因。先要看看抗体是不是有效，其次你的细胞有没有进行泛素化的过表达，然后是不是带标签的。还有加入mg132的时间可能需要摸一下。时间是关键，我的细胞泛素化发生的太快了，

1 回答939 围观

问请问用trizol提取的DNA可以用于表观修饰的实验吗？（如甲基化、CHIP等）

Guoood

可以使用传统trizol 法提取DNA进行甲基化等表观遗传实验，用试剂盒纯度和浓度反而不如trizol 法

5 回答474 围观

问CHIP超声后DNA浓度上不去，求助大神

xue454962321

按照CST9005试剂盒描述是抽提了细胞核，之后Micrococcal Nuclease酶切是在保证细胞核完整的状态下做的，离心之后需要的是沉淀（细胞核），这个时候上清里面是没有东西的，因为细胞核还没有被破膜；之后再把细胞核沉淀裂解，用超声的方法帮助破核膜，在离心取上清。此时，蛋白和核酸都应该在上清里面。如果你提取的是Micrococcal Nuclease酶切之后的上清，那应该就是没有DNA的；

2 回答463 围观

问为什么有的蛋白可以测磷酸化有的测不了？

一支肾上腺素

磷酸化蛋白可能仅占细胞总蛋白中的一小部分，处理不得当时，还会快速的去磷酸化。磷酸化蛋白质 WB 做不好的原因有许多，比如封闭问题，抗体问题，或所需的磷酸化蛋白可能不存在于样品中或者低于 WB 检测的量。

15 回答2171 围观

问求CHIP实验的详细步骤？

府宅

1) 将细胞或组织进行固定（交联）与裂解该步骤是在新鲜组织或活细胞中加入甲醛（终浓度1%），目的是稳定蛋白与DNA天然结合的状态，以免后续的实验步骤破坏这种相互作用。在固定完成后，细胞或组织进行充分裂解。固定时间一般为5-10 min，太长的固定时间将不利于后续的染色质片段化。强相互作用，如目的蛋白是组蛋白，固定时间应短一些：3-5 min。弱相互作用，尤其是间接相互作用蛋白，可适当延长固定时间，

2 回答488 围观

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