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CHIP超声后DNA浓度上不去,求助大神

相关实验:免疫共沉淀(Co-IP)

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如影随心

我们使用的CST 9003试剂盒,采用酶解加超声的方法。一开始按照说明书一个样用4×10的6次方的Siha细胞,配的500ul的体系,40%的功率,每次超20s,停10s,共3个循环。DNA片段合适,但浓度却很低。开始以为是细胞量不够,但将细胞提高到10的7次方后,DNA浓度并没有显著变化。求大神支招。
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2 个回答

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xue454962321

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按照CST9005试剂盒描述是抽提了细胞核,之后Micrococcal Nuclease酶切是在保证细胞核完整的状态下做的,离心之后需要的是沉淀(细胞核),这个时候上清里面是没有东西的,因为细胞核还没有被破膜; 之后再把细胞核沉淀裂解,用超声的方法帮助破核膜,在离心取上清。此时,蛋白和核酸都应该在上清里面。 如果你提取的是Micrococcal Nuclease酶切之后的上清,那应该就是没有DNA的; 如果你提取的是超声之后的上清,那应该是要有DNA的。
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xue454962321

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没有释放出来是只DNA量很少?如果是酶切方法片段化DNA,容易出现样品裂解不充分的情况,因为保证后面的酶切和IP实验,裂解液里面的SDS浓度都不能太高。
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