登录
测糖基化修饰水平出现两个条带的原因
丁香实验
我这里跑出来了两个条带（如下图1），我看文献里面都是一个条带（如下图2），想问一下有人遇到和我一样的情况吗？在文献中看到糖基化的WB的图片都是整张的，想知道为什么这样做呀？ 
分享
18 个回答
医往情深丁香园
有帮助
最好再重复一次实验看看，另外，别人做糖基化跑全膜，主要也是想说明多个糖基化的位点，所以可能出现条带的位置改变，在整张膜上，都可能出条带。
内科小护士
有帮助
一般来说蛋白糖基化条带两条，你需要检查一下自己使用的抗体是否正常。还有可能另一条蛋白条带不是自己的目的条带，可能抗体识别不是特别特异。
jey1235
有帮助
第一是确认抗体的抗原片段，是不是目标蛋白有不同isoform。
第二不同来源的样品可能会有所改善，的那是依然建议更换不同抗原的抗体。
第三全膜是因为细胞糖基化的蛋白有很多，全膜是看分析目的，有人整体分析全细胞就要全膜。
dxyhsx123
有帮助
首先确定，蛋白是否有其他亚型，看图片不像蛋白降解。其次确认一下抗体的特异性，更换一下其他家抗体试试。
ZZDX-YILILI
有帮助
1.首先确定抗体的特异性，如果抗体特异性没有问题，就考虑糖基化修饰的蛋白质本身是否容易形成二聚体啥的，所以导致有两条带。
2.用整张膜的好处一是充分显示marker不同大小位置，二是不确定蛋白质是否含有多个亚基。
verbalkint
有帮助
因为上面那些都是糖基化，通常来说检测修饰的话，如果不确定具体修饰位点或者涉及多个位点，都会用整张膜，如泛素化，糖基化等等
隔壁家的小夜猫子
有帮助
你的抗出来两条带可能是因为你用的细胞系里有这个蛋白不同大小的variant，糖基化乙酰化磷酸化这种通常都会看整张，因为它能抗出来所有被修饰的蛋白，这样对细胞内整体的修饰水平有个判断。
dxy_h7vcp8v3
有帮助
蛋白糖基化条带两条，检查自己使用的抗体是否正常。还有可能另一条蛋白条带不是自己的目的条带，可能抗体识别不是特别特异；文献中保留整张膜，是因为糖基化修饰后，偶尔会有大小不等的片段，作者可能想看整个过程。建议仔细阅读文献，检查自己的体系和方法。
dxy_bq4uxnd
有帮助
可以从两个方面分析，第一就是抗体出了问题，条带为非特异条带；第二是蛋白提取时没有加入正确的蛋白抑制剂，蛋白发生了变化。
dxy_pni5ki46
有帮助
RL2的抗体是识别有O-GlcNAc糖基化的蛋白，有糖基化的蛋白会有很多个分子量肯定都不一样所以需要做整张膜的
zxb597
有帮助
可能蛋白糖基化修饰的位点有差异，抗体问题。
dxy_4uyyu09r
有帮助
这种有修饰的蛋白出现两条带太正常了，文章中没出现可能是细胞系不同，我们以前做磷酸化修饰的时候经常遇到抗体出现多条带，虽然也有可能会是抗体特异性的问题，但对于这种明确修饰的蛋白，还是多考虑它是修饰引起的
飞天幻雪
有帮助
糖基化修饰出现两条带很正常的，不同处理或者不同细胞系曝光出来的蛋白出现不同条带很正常，你要看看文章中用的细胞株和你有什么区别。另外曝光整个片子有时候是为了证明实验结果的特异性。特别是这类修饰多的蛋白，还是很有必要的！
z流沙z
有帮助
一条带或者两条带可以参考买的抗体的说明书，有时候蛋白有修饰或者剪切，可能会有两条带。糖基化修饰会形成大小不同的smear，有可能就是一片下来，所以保留一整张膜
Guoood
有帮助
1.目的位置出现两个条带需要考虑抗体是否特异，如果特异再看看有无用错二抗。2.文献中用整张膜孵可能是该目的蛋白有不同亚型或裂解片段，用一个抗体可以同时呈现出来，在跑组织蛋白时我会这样做。
dxy_w4oj7yoe
有帮助
可能是抗体特异性问题，建议先验证一下抗体。也有可能是蛋白有降解，或者有其他蛋白也带上了这个修饰
bamboopiggy
有帮助
可能你的蛋白糖基化修饰的位点有差异，所有会出现两条带，当然也不排除你的胶，buffer等的有问题，最好再重复一次实验看看。另外，别人做糖基化跑全膜，主要也是想说明多个糖基化的位点，所以可能出现条带的位置改变，在整张膜上，都可能出条带。
vae1476
有帮助
糖基化，泛素化这一类，都会有很多个条带，在不同分子量出现，所以需要整张膜，建议你也孵育一下全膜，应该还有条带的
提问
扫一扫
实验小助手
关注公众号
反馈
TOP
打开小程序