磷酸化的抗体为什么总是杂不好

我牛奶和bsa都用过，这个其实是要看你的抗体好不好用，如果抗体好用，怎么杂怎么出。如果抗体不好用，一般都杂不好。此外，可以考虑在收样的lysis里面加点磷酸酶抑制剂。实在杂的难看，就换家公司买抗体，磷酸化的抗体，一般cst的还是不错的。

选择购买口碑较好的公司的一抗；孵育一抗的时候，建议用新鲜抗体；若磷酸化的条带很淡，有时候达不到制图标准，这点可以加大上样量来解决；严格遵守洗膜时间，不得减少次数，每个步骤洗 3 次，每次可以洗长一点，比如（11-12 分钟）。

磷酸化的蛋白很难跑，一般是使用5%BSA封闭，可以试着更换更好的抗体

强推BSA封闭，不要用脱脂奶粉封闭，BSA封闭对磷酸化的抗体效果非常好，而且也不贵，具体怎么配百度之。另外，BSA封闭液倒是可以反复使用不至于向奶粉一样臭掉，用来孵育一般非磷酸化的抗体，效果同样棒棒哒！

再者，封闭时间可以延长，一般封闭2-3小时的情况下，可以封闭延时到4小时，所以按照从早到晚做实验的时间，用BSA配好封闭液开始封闭的时候，您就可以慢慢的约个火锅唱个歌再回来了，实验本来就很辛苦，不要再依赖百度外卖大叔了。