目标蛋白和内参要在一张膜上曝光吗？

可以分开曝光，这样的话可以避免以为两张膜因为荧光的强弱差别太大导致曝光时间顾此失彼，根据你的情况你可以将蛋白上样跑胶后，根据marker将目的蛋白和内参分开切下来，并用不同时间或条件分别转膜后在曝光，这样的话就可以进行比较了。

在平行操作的情况下，内参和检测蛋白可以分开泡胶，分开转膜。你的两种蛋白分子量差异较大分开还是好的，尤其是转膜，时间的差异更大。但是，要注意平行操作

如果用胶片，要曝光在一张上，扫膜的话，就不用了

如果蛋白样品足够的话还是建议跑两块胶，分别看内参和蛋白；如果一定要在同一张膜上面看的话，可以先看目标蛋白的表达，再用stripping buffer孵育去除一抗，再重新封闭，按照一样的步骤看内参，但这种方法比较不好掌控，stripping不到位，原本的抗体会有残留，stripping过度的话，再看内参的信号会很差！