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western抗体孵育时间

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n0y0j7

封闭(1-2h?),一抗(1-2h?),洗(undefined3&1undefined3?),二抗(1h?),洗。时间长短有什么影响?时间长了有什么副作用?

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9 个回答

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实验菜狗lmd

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一抗孵育时间和抗体浓度有关,如果是首次使用的抗体,过夜四度(12-16 h )都可以,如果孵育时间过长会导致背景比较深

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dxy_tqt5xfh6

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4度摇床过夜(14h)条带好看

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齐天大圣还是个宝

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封闭,一抗和二抗的孵育时间和所用稀释液,孵育温度都有关系,如果普通的稀释液4℃可以封闭5小时,一抗过夜,二抗3-4小时,室温则大大缩短,如果用快速封闭液按说明书封闭即可,此外和抗体的新鲜程度也有关系。

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Eason老歌迷

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western blot 一抗孵育时间过长当然有影响的,一抗孵育时间太长容易导致非特异性吸附加深

一般可以室温孵育三十分,然后四度过夜。或者选择室温孵育2小时直接二抗。因为洗膜洗去的是未结合的抗体,抗体结合上就不容易洗掉了。洗膜不完全背景会深,但洗膜时间延长并不能完全去除背景。

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大草原的小灰驴

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1.首先建议仔细查看抗体试剂的说明书,全面掌握孵育的时间和温度等条件,考虑使用同一个厂家的配套试剂。

2.每一种试剂作用之后的洗涤过程,都需要标准操作,用力过猛或时间过久可能导致假阴性反应,而洗涤时间过短、冲洗不充分会导致假阳性反应。

3.设置阳性对照,监控抗原抗体反应和显色的过程,以便分析结果和过程中可能存在的问题。

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刹那芳华2333

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我们一般是一抗一个小时,二抗一个小时,洗的话每次10分钟,共三次

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bamboopiggy

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封闭最少40min可以,一抗一般四度过夜,洗10min洗3,二抗室温2h足矣。时间长点也可以。但是二抗孵育太长,容易黑,如果想长就放四度

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未来9

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一抗孵育温度有几种:4度、室温、37度,其中4度效果最佳;孵育时间与温度、抗体浓度有关,一般37度1-2h,4度过夜(从冰箱拿出后37度复温45min)。具体条件还要摸索。二抗一般室温或37度30min-1h,浓度一般有工作液,若是浓缩液还要摸索浓度。

孵育时间过长非特异性条带显现的可能增加

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天一湖医者

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一抗的孵育时间与温度、抗体浓度有关。一般情况下,在37℃的条件下,孵育1-2小时左右。在室温的条件下,孵育3小时左右。在4℃的条件下,孵育18-24小时左右。如果一抗的浓度过高或者是孵育时间过长,会导致非特异性吸附,增加洗涤的难度,最终因洗涤不彻底而出现非特性显色。

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