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蛋白质相互作用
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问
免疫共沉淀（Co-IP）实验目的蛋白高背景产生的原因及处理方法?
土井挞克树
目的蛋白高背景产生的原因有很多种，比如：1.有非特异性蛋白结合2.转移膜上的非特异性吸附针对有非特异性蛋白结合这种情况，我们可以在无血清培养液中裂解细胞，而对于转移摸上的非特异性吸附，我们就要注意实验的操作问题，一定要戴手套，用镊子夹取，以及不接触转移膜转移面。
3 回答
410 围观
问
如何检测两个蛋白质相互作用的强弱？
丁香实验
免疫共沉淀Co-IP。1. 转染，A与WT/MUT分别共转细胞；2. 裂解后，用anti-A抗体与lysates孵；加入结合抗体的proteinA/G beads结合；3. 洗beads。4. 洗脱。5. WB， 观看结合在beads上的A,B多少。A做内参control。看结合的B的差别。
1 回答
643 围观
问
CO-IP实验怎么区别是两种蛋白直接结合还是有其他蛋白辅助相互作用？
邓豆豆逗
Co-IP只能证明两种蛋白有相互作用，无法说明是直接还是简介的，如果想知道是直接还是间接的，可以做GST pull-down实验。
3 回答
592 围观
问
coip求助 coip后打质谱筛选到的蛋白又wb验证不到了为什么呀
bamboopiggy
所以coip的结果，还是要验证的，你最好。同时再挑一个别的蛋白，证明你的ip过程是没有问题的。
4 回答
629 围观
问
做COIP实验，互作的两个蛋白在目标位置有条带，但是阴性对照（NC）在相同蛋白分子量的位置也出现了浅条带，是什么原因？怎么改善？
小暮
阴性不应该有条带，有条带就是有结合，这个说明抗体有非特异结合的可能：1.抗体特异性不够，如果反复多次阴性对照出现条带考虑，更换抗体。2.上样错误，仅表现一次阴性对照阳性，重复实验就行
3 回答
379 围观
问
表达标签蛋白的时候，蛋白标签放在哪段？
水木杰
如果没有信号肽的话，n端和c端同时做，综合表型来看，哪个做出来用哪个，都做出来首选c端。当然，这两个都不行的话，只有放中间了
5 回答
11924 围观
问
免疫共沉淀检测到蛋白信号弱的原因是什么呢？
府宅
抗体浓度太低，应对措施：调整抗体浓度，必要时设立浓度梯度，摸索最佳浓度；
2 回答
389 围观
问
这个免疫共沉淀的图怎么看，我知道结果，我想知道怎么分析的。谢谢各位了
bamboopiggy
简单说一下，上面两个band是IP样品的结果，下面的是total input，也就是whole cell lysis 跑的。total input 可以看到his和flag的那俩蛋白 只要加进去就有表达。然后看ip的，用his去拉的，如果加入了lrp5-flag 就可以拉下来，说明两个有相互作用，在有TGF-β1的情况下，TβRI-his表达增加，但是加入lrp5-flag后，TβRI-his的表
3 回答
629 围观
问
用于酵母双杂交转化的质粒质量要比较高吗？
天一湖医者
是的，用于酵母双杂交转化的质粒质量要比较高。
5 回答
439 围观
问
酵母双杂交实验过程中，是否需要用到内切酶，有要求吗
迟C迟
构载体的时候可能需要限制性核酸内切酶把目的基因连入目的载体。转入酵母菌之后就按正常的protocol，后面就不需要内切酶啦。
3 回答
359 围观
问
为什么我的ChIP实验做出来，结果就是不理想呢？ 为得到理想的ChIP结果，怎么优化实验条件？
丁香实验
1、 染色质的制备：为了获得足量的染色质，我们的样品准备一定要充足。（IP实验的损耗较大，为保证实验用量，一次准备5×10E7个以上细胞较好）2、 优化交联固定条件：ChIP实验成功与否，直接取决于染色质完整性、抗原表位质量和抗体特异性（抗体一定买好的）。因此优化交联固定条件，富集丰度更高。3、 优化染色质片段化条件：要得到理想的ChIP结果，合适长度和浓度的染色质样品至关重要。（推荐的片段化程度
1 回答
504 围观
问
ChIP实验中需要选择ChIP级别抗体，没有ChIP级别抗体该怎么选择？如果我的实验种属比较特殊（果蝇，昆虫，植物等）该怎么选择
vae1476
实在没有的话，可以联系公司订制，但时间比较长，急的话，可以拿IP/IHC/ICC级别的抗体进行尝试
3 回答
632 围观
问
如何从一段DNA序列得到翻译的蛋白质,并与已知DNA序列进行比对?
cxsm
你这个应该是想比对测序数据吧，个人认为没有必要换成蛋白序列再去比对。这个可以按照如下流程:1.打开NCBI的网站，一直拉到页面的最下端，在popular纵列里点击blast，2.进去页面点击核酸的blast，3.align two or moresequence勾选上，再将目标序列和模板序列复制进去，点击blast，网页就能显示比对的结果了。
2 回答
549 围观
问
【求助】ChIP超声条件摸索
丁香实验
还有，一般超声片段范围在200_1000比较好，其实200_2000也是可以接受的，只要能保证70%以上在这个范围，就可以了！
2 回答
1384 围观
问
CHIP超声后DNA浓度上不去，求助大神
xue454962321
按照CST9005试剂盒描述是抽提了细胞核，之后Micrococcal Nuclease酶切是在保证细胞核完整的状态下做的，离心之后需要的是沉淀（细胞核），这个时候上清里面是没有东西的，因为细胞核还没有被破膜；之后再把细胞核沉淀裂解，用超声的方法帮助破核膜，在离心取上清。此时，蛋白和核酸都应该在上清里面。如果你提取的是Micrococcal Nuclease酶切之后的上清，那应该就是没有DNA的；
2 回答
443 围观
问
ChIP中input的问题
bob523740605
我最后做的是Qpcr ，数据分析的时候是一input为基准的分析，通过一个excel表分析http://http://d.dxy.cn/detail/4076728
2 回答
319 围观
问
染色体免疫共沉淀实验求助，那个proteinA/G是怎么回事？
丁香实验
别买磁珠 需要相应的仪器来做磁珠肯定方便些的还有就是珠子不容易吸走 背景好点噪音小不过细心点 用普通的beads 离心也就可以了
2 回答
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