提问
提问
我要登录
|免费注册

【求助】ChIP超声条件摸索

相关实验:免疫共沉淀确定结合蛋白实验

user-title

丁香实验

实验室新手请教前辈。 ChIP才开始做,还在摸超声条件,两边框为DNA marker是100~2000,附上三张电泳图,1.5%的胶,每个孔都是超声条件不同的组。看到论坛里大家的打的片段都集中在某一个区域,为什么我打出来是均一的一列都有。会不会和超声探头的粗细有关系,要不要换大一点的探头,我用的2mm探头。解交联的产物要不要浓缩一下再跑电泳。还有哪一组可以继续优化。我的条件是120w,2s on,5s off。time:各组30s~4min 不等。后两张图的第一组是未超声解交联产物,为什么都跑不出来。我用的材料是小鼠的肾脏小管细胞。
wx-share
分享

2 个回答

user-title

丁香实验

有帮助
还有,一般超声片段范围在200_1000比较好,其实200_2000也是可以接受的,只要能保证70%以上在这个范围,就可以了!
user-title

丁香实验

有帮助
我之前超声做的也很纠结,后来成功了,有一些经验可以跟大家分享一下。 1、首先是探头,每个实验室用的探头都不一样,关键是探头一定要伸到页面下,不要触管底,也不要触管壁,否则很容易起泡。我用的是6mm的探头,750微升的裂解液,2ML管子。 2、打超声的模式一般为:超声10-15s,间隔30-45s,如果温度过高间隔的时间还可以更长,然后超声循环数的摸索可以从9个循环开始,一般不超过15个循环,都摸索一下。 3、超声功率的确定。超声功率为不起泡的最大功率。比如你打10-15s,不起泡的最大功率就行。
提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
关注公众号
反馈
TOP
打开小程序