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家人们,大家表达含有标签的蛋白的时候,标签放在蛋白的哪一端呢?N端还是C端?另外,该如何选择蛋白标签呢?
水木杰
如果没有信号肽的话,n端和c端同时做,综合表型来看,哪个做出来用哪个,都做出来首选c端。当然,这两个都不行的话,只有放中间了
迟C迟
C端N端都有,看你们实验室载体情况 。比如我们实验室就喜欢在基因后面加GFP标签。
whilt-shirt
如果把蛋⽩标签放到N端,对于⼀些⽐较难表达的和蛋⽩太⼩容易被降解的蛋⽩,我们可以利⽤N端的蛋⽩标签。它可以保证蛋⽩的稳定性,同时不会对外源蛋⽩的免疫原性造成很⼤的影响,这种⽅法⽐较适合⽤于表位筛选。
但,凡事也有两⾯性,如果你要做的是分泌蛋⽩的话,会有这样的问题,在蛋⽩分泌到⾼尔基体的过程中,蛋⽩N端的信号肽,会被酶切掉。这样,你标签要是装在N端,就基本⽩瞎了
bamboopiggy
尽量放n端吧,我放c端,可以做ip,但wb做不出来。一般选择flag,myc,gfp,his等常用的标签都可以,这些都是大家常用的
未来9
根据以往的经验更建议添加在C端,主要基于两个原因,一个是因为如果标签蛋白在目的蛋白的C端,当实验可以检测到标签蛋白的表达的时候,理论上 目的蛋白肯定也已经表达;
第二个原因,有些蛋白会在 N端含有信号肽,如果将标签蛋白添加在目的蛋白的N端,当目的蛋白在 信号肽行使完其功能后就会被剪切掉,这个时候标签蛋白也会随之被剪切,那么就不能实现添加标签蛋白的目的了。
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