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实在没有的话,可以联系公司订制,但时间比较长,急的话,可以拿IP/IHC/ICC级别的抗体进行尝试
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首先,利用 CiteAb(http://www.citeab.com/)网站去查询,是否有市售商业化抗体。例如 Application 选择 ChIP,出现的 45 个抗体都是经过文献验证做过 ChIP 的。值得注意的是,这里的抗体也有 ChIP 和 ChIP-seq 之分,后者拥有更好的信噪比。若有,那么恭喜您,您离成功近了一步,但是需要注意的是,2011 年 Nat Struct Mol Biol 中曾对 ChIP 级别的抗体进行试验,结果只有 78% 的 ChIP 级别的抗体具有良好的特异性,同时,即使同一货号 ChIP 级别抗体,因批次的不同可能也会造成结果的差异。所以,当我们获得相应抗体时,一些相关的验证工作也是必不可少的。如果没有 ChIP 级别的抗体,又该如何呢?一种选择是制备抗体,但是不一定在 ChIP 实验里有良好的表现,只能进行尝试。另外一种解决办法就需要今天的主角登场-----标签抗体,原理就是进行目的蛋白和标签蛋白融合表达,随后利用标签特异性抗体获得目的蛋白-DNA 复合物。
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但是由于ChIP级别(ChIP验证)过的抗体数量非常有限,所以当没有ChIP级别抗体时,我们有如下3种方法可以考虑:
1选择IP/IHC/ICC进行尝试,一般在这些实验中抗体对蛋白的识别结构是native,和ChIP抗体识别结构较为相似;不建议尝试Western blot抗体,因为WB抗体识别的蛋白结构多是denature,并不适合ChIP实验;
2将蛋白的序列放在NCBI上进行Blast,如果蛋白序列同源性与其他种属或物种蛋白超过80%,可以尝试跨物种抗体;
3可以使用标签抗体
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