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99
条结果
综合
实验
方法
问答
文章
问
Q-
PCR
和
PCR
引物设计
的区别在哪？
啥也不懂来问we问
qpcr引物特异性要求更高，且qpcr扩增长度更短。
1 回答
292 围观
问
PCR
引物设计
及内参
Topmicro
取动物外周血进行实时荧光定量
PCR
目标基因和内参应该都用动物源的，如果检测肿瘤组织的话应该都用人源的。
3 回答
1273 围观
问
普通
pcr
引物设计
和荧光定量
pcr
引物设计
的区别
dxy_j7jezao0
qPCR为保证扩增效率，产物片段较小，70-250bp,TM值一般60左右其他差别较小
4 回答
3086 围观
问
STR
引物设计
如何开始呢？
天一湖医者
引物以18～30bp为宜；引物中C+G含量宜在50%左右；引物内部和引物之间不应含有互补序列；引物的碱基顺序与非扩增区域的同源性应小于70%；引物的3’末端与模板DNA一定要配对，但末端没有严格的限制，故
引物设计
时可在5’末端加上限制性内切酶位点和/或启动密码ATG等；引物合成后必须纯化以去除合成产物中的不完整序列、脱嘌呤产物、碱基修饰链等“杂质”；引物的终浓度一般为0.2～0.5μmol/L，过低会影响反应产量，过高会增加引物二聚或错配的几率。
2 回答
1505 围观
问
对于
pcr
引物设计
和荧光定量
pcr
引物设计
的根本区别在哪里？
秋秋欣欣
同一个基因的引物是没有区别的，只是没有扩增基因。
3 回答
908 围观
问
利用加尾法 real-time
PCR
方法检测 miRNA，
PCR
上游
引物设计
有什么诀窍和原则吗？
修玛杨
miRNA
引物设计
很麻烦，如果不差钱的话找靠谱的公司设计吧。就是那种能保证
引物设计
没有问题的公司，就是价格要比自己设计的高一些，但是省心。
2 回答
3905 围观
问
甲基化
引物设计
土井挞克树
DNA浓度太低会影响引物的结合，建议增加含量再设计引物
2 回答
475 围观
问
Oligo和primer—BLAST
引物设计
的缺点是什么？
dxy_aget1u8q
primer的设计引物操作简单，但是不灵活，最终引物好不好还是要看
pcr
结果
1 回答
543 围观
问
在做
PCR
的
引物设计
时添加酶切位点应该考虑哪些问题？
我是金博士
1、移码：这是最重要的，一定要放到具体的质粒上去看，看看你加的酶切位点，连上你的目的基因，是不是会引起移码。2、酶切位点是否好切：尽量选实验室常用的，前提是你的基因片段不能有酶切位点序列，要不然就会连基因也切碎了。3、保护碱基：针对不同的酶切位点，选择不同的碱基。一般是3个，至于具体选CG还是AT就要看你的引物Tm以及碱基含量。
1 回答
1787 围观
问
PCR
实验
引物设计
有什么要求？TM值一般多少最合适？
汤姆卜丽波
3’端的互补、二聚体或发夹结构也可能导致
PCR
反应失败，5、碱基要随机分布，且引物自身和引物之间 不能有连续4个碱基的互补。6、尽量在基因的编码区 （CDS序列）上设计引物，限制基因组DNA扩增。
5 回答
22108 围观
问
关于剪接体
引物设计
juyue2010
在两种剪接体的共有序列上设计引物就可以
3 回答
1340 围观
问
引物设计
一定从启动子开始吗？
dxy_np1w2as6
这题我会！不一定要从起启动子开始，可以从网站上查找目的基因mRNA的序列，之后从启动子两端的序列设计引物，这样可以选择很多引物配对，但是最后扩出来的序列一定要包含你的CDS区
5 回答
3531 围观
问
有大佬听说过接头引物的设计吗，和普通
PCR
引物设计
有什么不同吗
灵枢天问
在设计上和普通引物的原则是一致的，但是它的序列取决于你的目的基因序列和测序配套的接头要求
3 回答
542 围观
问
引物设计
的过长会有什么弊端？
sswei
引物过长会增加成本和引物的Tm 值,会影响
PCR
的特异性，引物越长,能够配对的概率减少,所以特异性增加或引物越长,包含的碱基越多,发生错配的概率就越高。
5 回答
10865 围观
问
引物设计
及内参问题（救救）
cxsm
这个检测的是人的前列腺癌的基因变化，应该用人的。
3 回答
576 围观
问
关于
PCR
的相关知识提问
bamboopiggy
就是把你要克隆的片段两头各取15个碱基，加上酶切位点和三个保护碱基就好。
2 回答
601 围观
问
引物设计
特异性好，但跑胶有隐约杂带是为什么呢
府宅
1.外源DNA污染 ，确保操作的洁净；2.Mg2+浓度偏高，因适当调整Mg2+使用浓度；3.若为
PCR
试剂盒，也可能时试剂盒本身质量有问题。
4 回答
742 围观
问
用软件进行
PCR
引物设计
时，怎么确保产物长度，怎么设计可以让引物在目的基因起始端
zj佐罗
直接在基因起始点选定引物，设定产物长度。
3 回答
897 围观
问
miRNA,cicrRNA的
引物设计
与编码RNA有什么不同呢？
诸葛靓LR1
方法选择不同miRNA较短，稳定性好，不易被破坏。针对它的表达，可以选择Northern印迹法，微点阵分析和荧光定量
PCR
。lncRNA长度较长，做Northern印迹的难度较大，一般选用荧光定量
PCR
或者荧光原位杂交。circRNA和lncRNA一样，一般选用荧光定量
PCR
或者荧光原位杂交。 研究RNA时，常常需要进行过表达和沉默操作。miRNA 很小，转染操作较方便，过表达的时候可以用mimics（模拟物），沉默的时候可以用inhibitor（抑制物）。用质粒或者病毒都可以达到稳定转导的效果
4 回答
412 围观
问
关于多转录本
PCR
loveliufudan
如果您已经优化过反应条件，但仍然出现多条带或无法扩增出全长片段，您可能需要考虑以下几点：
引物设计
：确保引物的特异性和合适的长度、浓度和退火温度。
PCR
条件优化：尝试优化
PCR
反应条件，例如，反应体系、退火温度、扩增循环数等，以提高扩增效率和特异性。产物纯化：进行
PCR
产物纯化，如凝胶回收或其他柱式纯化方法，以去除杂质并提高产物纯度。转化策略：如果您无法扩增全长片段，您可以考虑使用多段扩增、基因组编辑或其他策略来获得完整的基因序列。最后，关于转录本功能的类似性，虽然不同转录本的功能可能会有所
2 回答
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