跌进春风
大家好,目前我做甲基化遇到了一个问题,我的DNA经过天根的重亚硫酸盐处理之后,回收后的DNA浓度很低,20ng/ul左右。
然后一直在负20保存,用MethPrimer设计BSP的引物,一直没有条带。用的是高保真的酶进行的普通pcr。
想问一下大家都是怎么做的。
土井挞克树
DNA浓度太低会影响引物的结合,建议增加含量再设计引物
loveliufudan
以下是一些可能有用的建议:
确认DNA质量:由于您的DNA浓度很低,因此建议使用比较敏感的DNA定量方法,例如荧光分光光度计或比色法进行定量,以确保您的DNA质量足够好。此外,可以进行琼脂糖凝胶电泳检查DNA是否存在裂解或降解现象。
优化PCR反应体系:优化PCR反应条件可能是解决PCR无条带问题的关键。可以尝试不同浓度的模板DNA、引物、MgCl2和Taq聚合酶等组分来进行反应体系的优化,此外,也可以尝试使用不同的PCR程序和PCR仪器等来进行优化。
选择合适的引物:选择合适的引物是成功进行甲基化特异性PCR的重要因素之一。可以尝试不同的引物,例如使用不同长度的引物、不同的GC含量、不同的甲基化特异性位置等来进行优化。
增加PCR循环数:如果您的PCR反应体系已经优化,但仍然没有条带,则可以考虑增加PCR循环数来提高反应的敏感性。
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