甲基化 PCR

其他实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

甲基化特异性的PCR法（Methylation-Specific PCR，MS-PCR）是 Herman等（1996）在使用重亚硫酸盐处理的基础上新建的一种方法。该方法敏感性高，主要用于作定性研究。甲基化特异性聚合酶链反应（methylation-specific PCR，MSPCR），其作用原理基于DNA经亚硫酸氢钠处理后，来自父方非甲基化序列的胞嘧啶转变为尿嘧啶，而来自母方甲基化序列则保持不变，随后用具有高度特异性的引物进行扩增。

来源：丁香实验

操作方法

甲基化PCR

一、基因组DNA的提取此步重点在于DNA的纯度，即减少或避免RNA、蛋白的污染很重要。因此在提取过程中需使用蛋白酶K及RNA酶以去除两者。使用两者的细节： 1. 蛋白酶K可以使用灭菌双蒸水配制成20 mg/ml； 2. RNA酶必须要配制成不含DNA酶的RNA酶，即在购买市售RNA酶后进行再处理，配制成10 mg/ml。否则可能的后果是不仅没有RNA，连DNA也