关于多转录本PCR
菠萝凤梨
设计引物扩增全长，该基因显示大于4个转录本，需要全长，头尾引物相同无法区分。如图，一轮进行过条件优化，优化比下图效率高很多，但依然可见大小接近理论的多条带，取一轮产物p二轮全长的缺失了，也尝试过分离大量一轮产物切胶全长后p二轮，切胶时亮度比较高，后二轮要么位置不对，要么没产物，胶回收效率真的很低？
目前楼主已经p出最短的转录本了，进行细胞转染，得到一定结果，所以很期待全长片段的功能是否类似？急
2 个回答
土井挞克树
考虑还是引物的特异度差一些，建议更换一个特异度高的引物
loveliufudan
如果您已经优化过反应条件，但仍然出现多条带或无法扩增出全长片段，您可能需要考虑以下几点：
引物设计：确保引物的特异性和合适的长度、浓度和退火温度。
PCR条件优化：尝试优化PCR反应条件，例如，反应体系、退火温度、扩增循环数等，以提高扩增效率和特异性。
产物纯化：进行PCR产物纯化，如凝胶回收或其他柱式纯化方法，以去除杂质并提高产物纯度。
转化策略：如果您无法扩增全长片段，您可以考虑使用多段扩增、基因组编辑或其他策略来获得完整的基因序列。
最后，关于转录本功能的类似性，虽然不同转录本的功能可能会有所不同，但通常情况下，同一基因的不同转录本通常会编码相似的蛋白质，因此您可以根据已知的转录本功能来预测全长片段的功能。
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