菠萝凤梨
设计引物扩增全长,该基因显示大于4个转录本,需要全长,头尾引物相同无法区分。如图,一轮进行过条件优化,优化比下图效率高很多,但依然可见大小接近理论的多条带,取一轮产物p二轮全长的缺失了,也尝试过分离大量一轮产物切胶全长后p二轮,切胶时亮度比较高,后二轮要么位置不对,要么没产物,胶回收效率真的很低?
目前楼主已经p出最短的转录本了,进行细胞转染,得到一定结果,所以很期待全长片段的功能是否类似?急
毛利小五郎的徒弟
考虑还是引物的特异度差一些,建议更换一个特异度高的引物
loveliufudan
如果您已经优化过反应条件,但仍然出现多条带或无法扩增出全长片段,您可能需要考虑以下几点:
引物设计:确保引物的特异性和合适的长度、浓度和退火温度。
PCR条件优化:尝试优化PCR反应条件,例如,反应体系、退火温度、扩增循环数等,以提高扩增效率和特异性。
产物纯化:进行PCR产物纯化,如凝胶回收或其他柱式纯化方法,以去除杂质并提高产物纯度。
转化策略:如果您无法扩增全长片段,您可以考虑使用多段扩增、基因组编辑或其他策略来获得完整的基因序列。
最后,关于转录本功能的类似性,虽然不同转录本的功能可能会有所不同,但通常情况下,同一基因的不同转录本通常会编码相似的蛋白质,因此您可以根据已知的转录本功能来预测全长片段的功能。